一种携带外源基因在包装细胞中高效生产的重组病毒载体、其构建方法及其用途

摘要

本发明提供一种携带外源基因在包装细胞中高效生产的重组病毒载体、其构建方法及其用途。其特征在于：在该病毒可操作地连接的外源基因的3’非翻译区中插入有至少一个下述微小RNA的靶位点核苷酸序列：所述微小RNA在病毒包装细胞中高水平表达而靶细胞中不表达或低表达。从而实现选择性地抑制外源基因在病毒包装细胞中的表达，避免外源基因对病毒包装与生产的负面影响，提高病毒的生产效率和滴度，同时在靶细胞中不降低外源基因的表达水平，不影响治疗效果或研究外源基因的功能。

主权项

一种重组病毒载体，该载体可操作地连接有外源基因和微小RNA的靶位点核苷酸序列，其特征在于：在该病毒载体可操作地连接的外源基因的3’非翻译区中插入有至少一个下述微小RNA的靶位点核苷酸序列，所述微小RNA在病毒包装细胞中高水平表达而靶细胞中不表达或低表达；其中，所述外源基因为美罗华基因；所述微小RNA为miR‑15a，所述微小RNA靶位点序列由1个或多个相同的微小RNA靶位点序列以串联重复的方式构成，并且微小RNA的靶位点序列的单元个数为5；所述病毒载体为人类腺病毒载体，并且所述腺病毒载体来源于人类C亚属5型的腺病毒。