一种猪细小病毒基因工程疫苗的制备方法

摘要

本发明公开了一种猪细小病毒基因工程疫苗的制备方法。本发明所述方法首先是构建重组酵母表达载体pGAPZαA-VP2，然后电击转化巴斯德毕赤酵母菌株SMD1168，使VP2蛋白在YPD培养基中高效分泌表达，形成不含病毒核酸的病毒样颗粒，然后纯化蛋白，经SDS-PAGE和WesternBlot及电镜检测，加相应的免疫佐剂即制成了猪细小病毒基因工程疫苗。本发明所述方法制得的猪细小病毒基因工程疫苗解决了当前猪细小病毒传统疫苗存在的缺陷，可用于预防和治疗猪细小病毒感染及其引起的相关疾病，也同样适用于制备检测猪细小病毒抗体ELISA试剂盒的包被抗原。

主权项

猪细小病毒基因工程疫苗的制备方法，其特征在于包括如下步骤：（1）根据猪细小病毒VP2基因序列，构建重组酵母载体pGAPZαA‑VP2；（2）将线性化的重组酵母载体pGAPZαA‑VP2电击转化酵母菌株SMD1168，筛选高拷贝的重组酵母工程菌，鉴定；（3）将鉴定的阳性重组酵母工程菌进行发酵培养，表达猪细小病毒主要结构蛋白VP2；（4）对表达的结构蛋白进行纯化，加佐剂，制得猪细小病毒基因工程疫苗；其中，步骤（2）所述筛选高拷贝的重组酵母工程菌是将线性化的重组酵母载体pGAPZαA‑VP2电击转化酵母菌株SMD1168后，分别涂布于含100μL、150μL、200μL浓度为100mg/ml的 Zeocin抗性的YPDS平板；于30℃恒温培养箱中倒置避光培养2~3天，待白色的单菌落长出，即筛选出不同Zeocin抗性浓度下的高拷贝重组酵母工程菌；所述佐剂为纳米佐剂。