一种通用型RNA干扰载体及其构建方法和应用

摘要

本发明公开了一种通用型RNA干扰载体及其构建方法和应用，属于生物技术领域。本发明所述的干扰载体依次包括以下相连的各部分：绿色荧光蛋白、人U6启动子序列、多克隆酶切位点、人U6终止子序列、含有PCMV启动子的新霉素抗性基因、复制起始位点基因、氨苄青霉素抗性筛选基因以及用于载体线性化的酶切位点。本发明的干扰载体实现了不同操作情况下，对细胞基因表达的瞬时抑制或者稳定抑制，在建立稳定表达细胞系时，提高了转然后载体的整合效率.同时通过对hU6启动子进行改造，引入了2个酶切位点，线性化载体可以连接任意的目标oligoDNA，此oligoDNA仅含有2个额外核苷酸(即，不用于表达shRNA的核苷酸)，节省了试验成本。

主权项

一种通用型RNA干扰载体，其特征在于，所述的干扰载体依次包括以下相连的各部分：含有PCMV启动子的绿色荧光蛋白、人U6启动子序列、多克隆酶切位点、人U6终止子序列、含有PCMV启动子的新霉素抗性基因、复制起始位点基因、氨苄青霉素抗性筛选基因以及用于载体线性化的酶切位点；所述的通用型RNA干扰载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。