一种快速有效地用沃尔巴克氏体（Wolbachia）转染蚊子的方法

摘要

本发明公开一种快速有效地用沃尔巴克氏体(Wolbachia)转染蚊子的方法。它是采用活体解剖的方法直接获得含有沃尔巴克氏体的昆虫卵巢组织(来源丰富，且容易获取)，将其匀浆，再利用离心沉淀的方法使卵巢组织和沃尔巴克氏体分离，从而得到纯化的、可用于胚胎注射转染的沃尔巴克氏体。将该纯化的沃尔巴克氏体经常规方法注射转染蚊子胚胎，卵培育获得原代母成虫(G0)、获取原代母成虫与野生型公蚊交配后产生第一代(G1)蚊株从中筛选含有沃尔巴克氏体的阳性蚊株，由此筛选的阳性蚊株即为真正转染成功的蚊株。因此本发明的用沃尔巴克氏体转染蚊子的方法是一种快速有效的方法，本发明的实现有利于迅速的建立转染有沃尔巴克氏体的蚊株，从而有利于其大规模的应用。

主权项

一种快速有效用沃尔巴克氏体(Wolbachia)转染蚊子的方法，包括沃尔巴克氏体的获取，胚胎注射和转染成功蚊株的筛选，其特征在于：所述的沃尔巴克氏体的获取，包括以下步骤：(1)：昆虫卵巢的制备：解剖含有沃尔巴克氏体的昆虫，获得其卵巢，置于SPG缓冲液中；(2)：将卵巢匀浆，用SPG缓冲液冲洗收集，然后置于离心机中离心100g～1000g，1min～10min，取上清再离心5000g～15000g，5～20min，去除上清，沉积物再用SPG缓冲液冲悬，再离心100g～1000g，1min～10min，取上清，即得到纯化的沃尔巴克氏体，该纯化的沃尔巴克氏体即可用于蚊子的胚胎注射；所述的转染成功蚊株的筛选是将胚胎注射后的蚊卵培育获得原代母成虫、获取的原代母成虫与野生型公蚊交配后产生第一代蚊株，从中筛选含有沃尔巴克氏体的阳性蚊株，由此筛选获得的阳性蚊株即为转染成功的蚊株。