主权项 |
一种鲟科鱼类卵子的筛选方法,其特征在于鲟科鱼类卵子的筛选方法,按以下步骤进行:一、从鲟科鱼类体内取出卵子;二、制备卵提取液:将步骤一取出的卵子剪碎,取鲜重5g,加入12~17mL浓度为0.02~0.05mol/L、pH为7.2~8.0的Tris‑HCl缓冲液,在0~4℃研磨,得到的匀浆于12000~20000r/min的转速离心10~20min,取上清液,即为卵提取液;三、血清的制备:将20~30mL新鲜的鲟科鱼类尾椎静脉血或尾椎动脉血室温放置20~40min后,于0~4℃低温保存20~25h,然后于2000~4000r/min离心20~30min,抽取血清,保存备用;四、体液的制备:将步骤一取出的卵子经筛网过滤后,采集卵腔液15mL/尾,于液氮罐内保存:五、测定卵母细胞的极化指数;六、测定鲟科鱼类血清卵黄蛋白原浓度;七、根据卵提取液测定鲟科鱼类卵Fe离子的含量、卵Zn离子的含量、卵VE的含量和卵谷草转氨酶的含量;八、根据体液测定鲟科鱼类体液ACP的含量和AKP的含量;九、选取同时满足从鲟科鱼类体内取出卵子中85%的卵子的卵母细胞的极化指数≥0.07,鲟科鱼类血清卵黄蛋白原浓度≥200μg/mL,卵Fe离子的含量≥170μmol/L,卵Zn离子的含量≥145μmol/L,卵VE的含量≥0.12g/mL,卵谷草转氨酶的含量≥1400U/L,体液ACP的含量≥85U/g和AKP的含量≥39U/g的鲟科鱼类的卵,即完成鲟科鱼类卵子的筛选。 |