单核苷酸多态性的实时PCR检测

摘要

公开了用于实时PCR中的多态性检测的方法和试剂盒。使用PCR引物执行对靶核酸序列的实时PCR扩增，其中，引物退火到与目标的单核苷酸多态性(SNP)侧接的序列。实时PCR反应包括标记的探针，标记的探针包括被设计为退火到在SNP位置处的DNA序列的RNA序列。然后，可以在PCR片段中的SNP和与SNP互补的探针的RNA序列之间形成RNA:DNA异源双链体。RNA酶H对RNA:DNA异源双链中的RNA序列的切割导致由标签产生的信号的强度的增加，这表明在靶核酸中存在SNP。

主权项

一种用于靶DNA中的多态性的实时检测的方法，包括以下步骤：a)提供将被检测具有多态性的靶DNA的存在的样品；b)提供能够退火到靶DNA的扩增引物对，其中，第一扩增引物在多态性的位置的上游退火，第二扩增引物在多态性的位置的下游退火；c)提供包括可检测的标签以及DNA和RNA核酸序列的探针，其中，探针的RNA核酸序列与包含多态性的靶DNA序列的选择区域完全互补，探针的DNA核酸序列与和靶DNA序列的选择区域相邻的DNA序列基本上互补；d)在扩增聚合酶活性、扩增缓冲液、RNA酶H活性和探针的存在下以及探针中的RNA序列能够与包含多态性的PCR片段中的互补的DNA序列形成RNA:DNA异源双链体的条件下，扩增第一扩增引物和第二扩增引物之间的PCR片段；以及e)检测来自探针上的标签的信号发射的实时增加，其中，信号的增加表明靶DNA中存在多态性。