用于同时检测沙门菌枸橼菌变形菌和爱德华菌的多重PCR引物及其设计方法

摘要

用于同时检测沙门菌枸橼菌变形菌和爱德华菌的多重PCR引物及其设计方法，涉及沙门氏菌等的检测。沙门氏菌引物对应的PCR扩增片段为526bp，弗氏枸橼酸杆菌引物对应的PCR扩增片段为161bp，奇异变形杆菌引物对应的PCR扩增片段为396bp，迟缓爱德华菌引物对应的PCR扩增片段为330bp。1设计多重PCR引物组合；2对引物组合中的引物进行筛选，保留不能合成引物二聚体的引物；3判断所保留引物的竞争优劣状态，将步骤2保留不能合成引物二聚体的引物的GC%和碱基数进行比较，选取GC含量高的判断为竞争状态优势引物，转步骤5；否则转步骤4；4再次筛选竞争状态劣的引物；5对竞争状态优引物扩增。

主权项

用于同时检测沙门氏菌、弗氏枸橼酸杆菌、奇异变形杆菌和迟缓爱德华菌的多重PCR引物，其特征在于为：S.spp.F1：5’‑GCCGGTAAACTACACGATGA‑3’；S.spp.R1：5’‑GAGTTACTGAACCAACAGCT‑3’；C.freu.F1：5’‑AACATAGCGATGGACAACTGA‑3’；C.freu.R1：5’‑TTAGCAAAAATTTAAGCCGGT‑3’；P.mira.F1：5’‑TTTATCAATAGCCTCAAACCCT‑3’；P.mira.R1：5’‑TGCGTCACCCTCTAACTCATCC‑3’；E.tarda.F1：5’‑CTGGGCAAGTATCCGACCTC‑3’；E.tarda.R1：5’‑GGTAACCGTATCGGCGTAAG‑3’；其中，S．spp.为沙门氏菌的英文缩写，C．freu.为弗氏枸橼酸杆菌的英文缩写,P．mira.为奇异变形杆菌的英文缩写，E．tarda.为迟缓爱德华菌的英文缩写；S.spp.F1和S.spp.R1为根据沙门氏菌FimA基因设计的上游引物F1和下游引物R1；C.freu.F1和C.freu.R1为根据弗氏枸橼酸杆菌Idh基因设计的上游引物F1和下游引物R1;P.mira.F1和P.mira.R1为根据奇异变形杆菌IdsC基因设计的上游引物F1和下游引物R1；E.tarda.F1和E.tarda.R1为根据迟缓爱德华菌FimA基因设计的上游引物F1和下游引物R1；所述沙门氏菌引物对应的PCR扩增片段大小为526bp，弗氏枸橼酸杆菌引物对应的PCR扩增片段大小为161bp，奇异变形杆菌引物对应的PCR扩增片段大小为396bp，迟缓爱德华菌引物对应的PCR扩增片段大小为330bp。