主权项 |
脂肪酶催化猪油合成抗坏血酸脂肪酸酯的方法,其特征为:1)复合脂肪酸甲酯的制备称取猪油,按精制猪油与甲醇摩尔比为1∶4~5加入甲醇,按猪油体积分数40%加入叔戊醇,混合均匀后,按猪油质量分数2~5%加入固定化脂肪酶Novozym 435,置于50℃恒温摇床中以200r/min的转速醇解反应10h,反应结束后,过滤除去固定化脂肪酶,反应液经减压蒸馏出甲醇和叔戊醇,并移入分液漏斗,静置后分离出下层的甘油,上层为纯度98%油状的复合脂肪酸甲酯;2)非水体系中脂肪酶催化合成L‑抗坏血酸脂肪酸酯按L‑抗坏血酸与复合脂肪酸甲酯的摩尔比为1∶2~11称取L‑抗坏血酸和步骤1)得到的复合脂肪酸甲酯,加入20ml反应介质中,在反应温度50~55℃下预热使反应物溶解并混合均匀,然后按复合脂肪酸甲酯质量分数10~20%加入Novozym 435固定化脂肪酶,反应混合物在50~55℃摇床中以180r/min的转速转酯化反应4~33h,得到L‑抗坏血酸脂肪酸酯的反应液;或者按L‑抗坏血酸与复合脂肪酸甲酯的摩尔比为1∶2~11称取L‑抗坏血酸和复合脂肪酸甲酯,在规格为20×250mm的不锈钢柱里装入L‑抗坏血酸,20×100mm的不锈钢柱里按复合脂肪酸甲酯质量分数10~20%装入Novozym 435固定化脂肪酶,放入50~55℃恒温水浴锅中,在称取复合脂肪酸甲酯的物料瓶中,加入300ml反应介质,并通过磁力搅拌器不断搅拌,然后依次将蠕动泵、L‑抗坏血酸柱和酶柱用耐有机溶剂的硅胶管连接起来,启动恒流泵,流速为0.5~2.0mL/min,循环反应20~24h,得到L‑抗坏血酸脂肪酸酯的反应液;其中反应介质为异辛烷∶叔戊醇体积比7∶3;3)产物的分离纯化有机溶剂萃取法,先通过过滤的方法除去步骤2)得到的L‑抗坏血酸脂肪酸酯反应液中的固定化脂肪酶,将滤液真空蒸发除去有机溶剂后,在25~50℃下溶解于正己烷中,4℃下静止,于4℃高速离心20min得到沉淀,沉淀用乙酸乙酯溶解后,再加入乙酸乙酯体积4倍的去离子水,充分混匀,置于分液漏斗中静置分层,取上层液低压真空干燥得到白色结晶;或者硅胶柱分离法,硅胶浸泡于含体积比5%异丙醇的正己烷中,湿法上柱,用含5%异丙醇的正己烷洗脱2~3个柱体积平衡后上样,用含体积比5%异丙醇的正己烷洗脱去杂,然后用含10%异丙醇和20%异丙醇的正己烷分段洗脱并收集,将收集液低压真空干燥得到白色结晶。 |