一种生产饲用固定化葡萄糖氧化酶的方法

摘要

一种生产饲用固定化葡萄糖氧化酶的方法，包括如下步骤：（1）稻壳吸附剂的制备；（2）葡萄糖氧化酶的吸附；（3）葡萄糖氧化酶的包埋。本发明采用稻壳为原料，制成富含活性炭和白炭黑的稻壳吸附剂，以稻壳吸附剂为载体固定化葡萄糖氧化酶，制备具有吸附真菌毒素、抑制有害细菌生长、提高饲料转化率等多种功能的饲料添加剂。葡萄糖氧化酶经稻壳吸附剂固定化后，酶活力回收率可达75%以上，保存30天后酶活力回收率仍在70%以上，其稳定性较游离葡萄糖氧化酶显著提高。本发明工艺简单、易操作，降低了固定化葡萄糖氧化酶的原料成本和生产成本，同时还能实现稻谷加工副产物的高值利用。

主权项

一种生产饲用固定化葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）稻壳吸附剂的制备：将稻壳粉碎，过20目筛，经102℃～108℃烘箱干燥后，取30g～35g置于瓷坩埚内，将瓷坩埚于马弗炉内进行炭化，炭化温度350℃～450℃，保温时间30～60min，冷却后得到炭化稻壳；   取炭化稻壳15g～20g，加入50mL～100mL 4mol/L的NaOH溶液，95～105℃反应2～4小时，抽滤去除溶液，并用蒸馏水将滤渣洗涤至中性，然后将滤渣置于102～108℃烘箱中烘干备用；取8g～10g干燥滤渣，加入16g～20g固体磷酸，于马弗炉内进行活化，温度350℃～450℃, 活化时间在60min～90min，冷却后用蒸馏水洗涤至中性，在102～108℃烘箱中烘干，然后粉碎，过40目筛，得多孔稻壳吸附剂； （2）葡萄糖氧化酶的吸附：取5mg～6mg葡萄糖氧化酶溶解于50mL～60mL磷酸缓冲液中，加入0.5g～0.6g稻壳吸附剂，室温下搅拌2h～3h，然后放入4℃～6℃冰箱中静置过夜，离心弃去上清液，沉淀用蒸馏水洗涤3次，抽滤，滤渣即为吸附了葡萄糖氧化酶的稻壳吸附剂；（3）葡萄糖氧化酶的包埋:将步骤（2）吸附了葡萄糖氧化酶的稻壳吸附剂加入到100mL～120mL 2wt%的海藻酸钠溶液中，搅拌均匀后，将海藻酸钠悬浮液滴入1wt%的氯化钙溶液中，制成直径为3mm～4mm的固定化凝胶珠，将固定化凝胶珠在4℃～6℃冰箱中静置过夜，用蒸馏水洗涤3次，过滤，滤渣即为固定化葡萄糖氧化酶。