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一种流动注射固定化酶抑制分析方法，采用具有循环回路的流动注射固定化酶分析系统，反应底物能循环流过反应器持续进行酶促反应，系统采用检测和参比两个回路，两回路为孪生结构，检测反应器和参比反应器中放置对环境污染物敏感的同批次固定化酶，在一定流量、温度、pH等分析条件下，使用检测器全程监测检测反应器和参比反应器的响应信号差，其特征在于，该分析方法包括下列步骤：(a)检测回路和参比回路分别通入缓冲液和含大剂量环境污染物的样液，并循环流过检测反应器和参比反应器一定时间，对参比反应器中的固定化酶进行人工钝化、灭活，然后检测回路和参比回路同时引入定量、定浓度的过量底物，底物循环流过检测反应器和参比反应器持续进行酶促反应，检测器得到检测反应器和参比反应器的响应信号差，判断检测反应器和参比反应器响应信号差开始下降的时刻并作为过渡时刻，变换不同初始酶活度的固定化酶，所述的固定化酶的初始酶活度为已知，重复得到固定化酶的过渡时刻‑初始酶活度的标准关系；(b)检测反应器和参比反应器中放置的同批次固定化酶的初始酶活度为已知，检测回路和参比回路分别通入样液和缓冲液，并循环流过检测反应器和参比反应器一定时间，对检测反应器中的固定化酶进行抑制，然后检测回路和参比回路同时引入定量、定浓度的过量底物，底物循环流过检测反应器和参比反应器持续进行酶促反应，检测器得到检测反应器和参比反应器的响应信号差，变换不同环境污染物浓度的样液，所述的环境污染物浓度为已知，重复得到不同初始酶活度下的响应信号差‑环境污染物浓度的标准关系；(c)检测回路和参比回路分别通入待测样液和缓冲液，并循环流过检测反应器和参比反应器一定时间，对检测反应器中的固定化酶进行抑制，然后检测回路和参比回路同时引入定量、定浓度的过量底物，底物循环流过检测反应器和参比反应器持续进行酶促反应，检测器得到检测反应器和参比反应器的响应信号差，判断检测反应器和参比反应器响应信号差开始下降的时刻并作为过渡时刻，通过参照步骤(a)得到的过渡时刻‑初始酶活度标准关系得到过渡时刻对应的固定化酶的初始酶活度，进一步参照步骤(b)得到的响应信号差‑环境污染物浓度的标准关系得到此初始酶活度下检测反应器和参比反应器中的响应信号差对应的待测样液中环境污染物的浓度。 |
