发明名称 |
一种灰葡萄孢特异性PCR检测方法 |
摘要 |
本发明公开了一种灰葡萄孢特异性PCR检测方法,包括如下步骤:根据RAPD标记获得灰葡萄孢菌特异性片段,设计扩增引物对序列B1SE11f和B1SE11r;提取样品DNA,PCR法扩增;凝胶电泳检测扩增产物,判断样品是否含灰葡萄孢菌;所述判断具体为:若电泳结果在327bp出现单一扩增条带,则说明样品中含有灰葡萄孢菌。本方法可检测到0.4纳克灰葡萄孢菌DNA,可特异性区分葡萄孢属其它种真菌以及其近缘属真菌,且能直接应用于田间检测。采用本发明检测灰葡萄孢菌,检测时间短,成本低,检测结果特异,结果判定简单。 |
申请公布号 |
CN103146812A |
申请公布日期 |
2013.06.12 |
申请号 |
CN201310027722.1 |
申请日期 |
2013.01.24 |
申请人 |
华中农业大学 |
发明人 |
张静;范璇;李国庆;杨龙 |
分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I;C12Q1/04(2006.01)I;C12R1/645(2006.01)N |
主分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
代理机构 |
武汉宇晨专利事务所 42001 |
代理人 |
王敏锋 |
主权项 |
一种灰葡萄孢特异性PCR检测方法,其步骤为:1)CTAB法提取样品真菌菌丝基因组DNA;2)PCR法扩增,PCR反应体系具体为:样品基因组DNA 1µL;10×PCR buffer 2.5µL;2.5mM dNTP Mixture 0.5µL;5U/µL rTaq酶0.25µL;一对20µM引物分别0.5µL;ddH2O 19.75µL;总体系25µL;PCR反应程序具体为:94℃预变性5min;94℃变性30s,56℃退火30s,72℃延伸1min,27个循环;72℃延伸10min;降温至16℃维持5min;所述引物对为:B1SE11f:5’–CAGGAAACACTTTTGGGGATA–3’;B1SE11r:5’–GAGGGACAAGAAAATCGACTAA–3’ ;3)凝胶电泳检测扩增产物,EB染色观察,在327bp处存在单一扩增条带表明样品中含灰葡萄孢。 |
地址 |
430070 湖北省武汉市洪山区狮子山街特1号 |