一种适用于双向电泳的甘蔗蛋白质提取方法

摘要

本发明涉及一种适用于双向电泳的甘蔗蛋白质提取方法。本发明对甘蔗蛋白质提取体系进行优化，将冰浴超声与漩涡震荡交替使用，提高了蛋白质得率。本发明的方法具有药品配制简单、操作方便、蛋白得率高、杂质少的优点。该方法比较适用于稀有材料或蛋白质提取纯化较困难的材料。使用本方法得到的蛋白占粗蛋白粉末的48%-60%，显著高于传统方法的8%-15%，同时所得粗蛋白粉末质量好，完全满足双向电泳的要求，对甘蔗蛋白质组学的研究具有重要意义。

主权项

一种适用于双向电泳的甘蔗蛋白质提取方法，其特征在于操作步骤如下：（1）取甘蔗正一叶位的新鲜叶片，清洗干净后剪碎，秤取2.0 g，置于盛有液氮的研钵中，加入0.2 g PVP，研磨成粉末；（2）将粉末全部转入50 mL离心管中，加入4 ℃预冷的提取缓冲液5 mL，使用时加入0.2 mL β‑巯基乙醇；所述提取缓冲液配制方法为：取蔗糖150 g，SDS 7.5 g，用pH8.8的Tris‑HCl 缓冲液定容至500 mL； （3）漩涡振荡5 min后，冰浴条件下重复超声2次，每次超声处理 5‑10 min，期间摇匀，超声强度为0.4 ‑0.6w/cm2； （4）加入5 mL pH8.8的Tris饱和酚，漩涡5 min，冰浴条件下重复超声2次，每次超声处理5‑10 min，期间摇匀，超声强度为0.4 ‑0.6 w/cm2；  （5）静置30 min后分层，12000 rpm离心25 min，取上层酚相加5倍体积的‑20 ℃预冷甲醇‑醋酸铵溶液，混匀，‑20℃处理10‑16 h； （6）4 ℃ 12000 rpm离心30 min弃上清液，加入5 mL ‑20 ℃预冷的甲醇‑醋酸铵溶液洗涤，收集沉淀，置于‑20 ℃冰箱3‑5 h； （7）用‑20 ℃预冷的丙酮洗涤沉淀3次， 0 ℃条件下真空干燥1.5 h，获得粗蛋白粉末。