利用快速蛋白质液相色谱测定木瓜蛋白酶纯度的方法

摘要

本发明涉及一种利用快速蛋白质液相色谱测定木瓜蛋白酶纯度的方法，包括：配制流动相A溶液：乙酸-乙酸钠缓冲溶液和流动相B溶液：乙酸-乙酸钠-氯化钠缓冲溶液；分别将精制的木瓜蛋白酶和粗制的木瓜蛋白酶置入50ml容量瓶内，加入流动相A溶液至50ml刻度线定容，摇匀，至木瓜蛋白酶充分溶解；最后利用快速蛋白质液相色谱FPLC的离子交换色谱柱进行层析分离，通过计算峰面积比值的公式来计算木瓜蛋白酶的纯度。该测定方法快速、操作简单，耗时少，结果可信，重复性高，为精确测定木瓜蛋白酶的纯度提供依据，具有重要的学术价值和实际应用意义。

主权项

一种利用快速蛋白质液相色谱测定木瓜蛋白酶纯度的方法，包括：（1）配制流动相流动相A溶液：0.02~0.1mol/LpH4.5的乙酸‑乙酸钠缓冲溶液；流动相B溶液：含1.0~2.0mol/L氯化钠的0.02~0.1mol/LpH4.5的乙酸‑乙酸钠缓冲溶液；（2）制备对照品溶液将精制木瓜蛋白酶置入50ml容量瓶内，加入流动相A溶液至50ml刻度线定容，摇匀，至精制木瓜蛋白酶充分溶解，制得精制木瓜蛋白酶对照品溶液；（3）制备供试样品溶液将粗制木瓜粉置于50ml容量瓶中，加入流动相A溶液至50ml刻度线定容，摇匀，经滤纸过滤，备用；（4）利用快速蛋白质液相色谱FPLC的离子交换色谱柱进行层析分离，通过计算峰面积比值的公式：X=（粗制木瓜蛋白酶的峰面积×精制木瓜蛋白酶的浓度）/（精制木瓜蛋白酶的峰面积×粗制木瓜蛋白酶的浓度）×100%，来计算木瓜蛋白酶的纯度；其中色谱条件是离子交换柱为HiTrapTM SPXL1ml，流动相A溶液为0.02~0.1mol/L pH4.5的乙酸‑乙酸钠缓冲溶液，流动相B溶液为含1.0~2.0mol/L氯化钠的0.02~0.1mol/LpH4.5的乙酸‑乙酸钠缓冲溶液，上样量为250~500μl，平衡为5~10个柱床，冲洗为5~7个柱床，洗脱梯度为流动相B溶液在15~25个柱床内由0%线性增加至70%‑100%，流速为0.8~1.0ml/min。