一种太子参脱病毒方法

摘要

本发明基于超低温结合组织培养技术原理，形成了一种太子参脱病毒方法，主要步骤包括茎尖剥离、高渗负压预培养、超低温处理、程序回温、恢复培养、常规培养和病毒检测。本发明其优点在于高渗负压预培养步骤一次性解决预培养和通常的包埋玻璃化两个过程，简化了步骤，节省人力和成本，提高生产效率；程序回温避免了40℃水浴回温对茎尖的损伤；无暗培养过程，简化了步骤；显著提高太子参脱毒率，脱毒率达98%，脱毒成功率达80%以上。

主权项

一种太子参脱病毒方法，其特征在于包括以下操作步骤：（1）、茎尖剥离  选取太子参，在无菌条件下，利用双目解剖镜切取1‑5mm的茎尖用于试验；（2）、高渗负压预培养  将剥取茎尖转到10‑30%蔗糖的液体MS培养基中，置0.5‑0.8Pa的培养箱中，预培养12‑48h；（3）、超低温处理、程序回温  将预培养的茎尖置铝箔条上，在液氮‑196℃里蘸一下，装入盛满液氮的5 mL冷冻管中，投入液氮，并保持10 ‑50 min；从液氮中取出冷冻管，取出铝箔条，放入0‑5℃冰箱5‑30 min，再在20‑30℃环境放置10‑60min后，浸入液体MS溶液，晃动并洗下茎尖，转入新的液体MS溶液洗涤5‑40min；（4）、恢复培养  将洗涤后的太子参茎尖转到恢复培养基MS+0.5 mg/L玉米素+0.1 mg/LNAA+1.0 mg/L GA3中进行恢复培养；直接在1500‑3000 Lux光照下培养7 d，再转到5000‑6000 Lux光照下培养；1个月后，观察并统计结果；（5）、常规培养   当再生植株根长1‑2cm时，即可转入改良MS培养基常规培养。