一种抗HIV药物的筛选方法

摘要

本发明公开了一种抗HIV药物的筛选方法，其通过将待测样品添加至表达hA3G与报告基因的融合蛋白以及Vif的细胞，通过考察报告基因编码产物的量，来判断样品对Vif途径的阻断作用，并进一步判断初选的样品是否为蛋白酶体降解途径的抑制剂，从而筛选出抗HIV的药物。本发明的筛选方法选择hA3G作为靶点，解决了病毒高变异导致的耐药性问题，且与目前临床应用的抗HIV-1药物无交叉耐药性。

主权项

一种抗HIV药物的筛选方法，其包括如下步骤：（1）制备共表达hA3G与报告基因的融合蛋白以及Vif的细胞，该细胞含有表达载体pEYFP‑N1‑APOBEC3G和表达载体pcDNA‑hvif；在表达hA3G与报告基因的融合蛋白以及Vif的细胞中VIF蛋白特异性地结合hA3G，并与细胞蛋白Cu15，elongins B和C以及Rbx1相互作用，形成Skp1‑cμllin‑F‑box(SCF)复合物，通过泛素介导的降解途径，导致hA3G报告基因的降解；（2）添加待测样品至步骤1所述的细胞；检测细胞报告基因表达产物量的变化，选择能使报告基因表达产物量上升的样品；（3）从步骤（2）选择的样品中选择非蛋白酶体降解通路阻断的样品，其方法是：将步骤（2）选择的样品添加至表达P53与报告基因的融合蛋白以及E4orf6的细胞，通过与对照比较，选择报告基因编码产物量相对较低的样品；所述表达P53与报告基因融合蛋白以及E4orf6的细胞通过如下方法构建：构建表达P53蛋白与黄荧光蛋白的融合蛋白的表达载体以及表达E4orf6的表达载体，将构建的表达载体共转染293T细胞，并筛选阳性克隆；所述表达P53与黄荧光蛋白的融合蛋白的表达载体为pEYFP‑N1‑P53；所述表达E4orf6的表达载体为E4orf6‑myc。