一种用金磁微粒纯化植物组织基因组DNA的方法

摘要

本发明的目的是提供一种利用磁性纳米复合材料进行简便、快速纯化植物组织基因组DNA的方法。本发明裂解样品是采用两种裂解液，其中第一种裂解液中含有质量体积比为2％～5％PVP、2％～5％CTAB和体积分数为0.5％～2％β-巯基乙醇，第二种裂解液中含有3～6M盐酸胍、体积分数为2％～5％Triton X-100；混匀后于水浴中充分裂解5～30min，再加入10～50μl的10mg/ml RNase溶液，得到含有基因组DNA的样品裂解液。该纯化方法操作简便，纯化过程快速，无需分步裂解组织，极大程度的满足对多种植物及其不同部位基因组DNA的提取，具有纯化率高，DNA完整性好、纯度高等优点。

主权项

一种用金磁微粒纯化植物组织基因组DNA的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：1)制备含有基因组DNA的样品裂解液取植物组织样本，依次加入100～800μl的等量的两种裂解液，其中第一种裂解液的组成如下：质量体积比为2%～5%聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、2%～5%十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、体积分数为0.5%～2%β‑巯基乙醇，0.005～0.01M乙二胺四乙酸(EDTA)、0.5～2M NaCl，0.05～0.2M Tris‑HCl，第二种裂解液的组成如下：3～6M盐酸胍、体积分数为2%～5%Triton X‑100；混匀后于水浴中充分裂解5～30min，再加入10～50μl的10mg/ml RNase溶液，得到含有基因组DNA的样品裂解液；2)用氯仿抽提后离心用0.6ml～1.2ml氯仿在所述样品裂解液中进行样本抽提，然后8000rpm～13000rpm离心5min，得到含有基因组DNA的上清；3)结合取400～1000μg金磁微粒与含有基因组DNA的上清混合，在结合缓冲液的作用下，形成含有金磁微粒‑基因组DNA复合物的溶液；4)清洗对含有金磁微粒‑基因组DNA复合物的溶液进行磁性分离，弃去上清液，再加入清洗液混匀，磁性分离，弃上清，得到金磁微粒‑基因组DNA复合物；5)洗脱将洗脱液与金磁微粒‑基因组DNA复合物混匀，使基因组DNA从金磁微粒上转到洗脱液中，磁性分离直至上清澄清，收集上清液，所得上清液即为纯化得到的基因组DNA溶液。