一种检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素A的双抗体夹心法

摘要

一种检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素A的双抗体夹心法，属于免疫分析技术领域。本发明应用购于北京军事医学院的重组金黄色葡萄球菌肠毒素A（SEA）免疫8周龄的BALB/c小鼠，经过正常的免疫、细胞融合、筛选后得到10株SEA单克隆抗体，10株抗体分别标记辣根过氧化物酶（HRP）并进行两两配对。最后选定以JN2011-01、JN2011-02分别为包被抗体和酶标抗体，以SEA为标准品建立了SEA的夹心ELISA分析方法，LOD为0.23ng/mL，线性范围为0.5-8ng/mL。本发明采用理化性质高度均一、特异性好、可以大量制备的单克隆抗体，建立的双抗体夹心法灵敏度高，成本低，与金黄色葡萄球菌肠毒素B、C、D、E无交叉反应，为食品中SEA的检测提供了快速高效的分析手段。

主权项

一种检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素A的双抗体夹心法，其特征在于：酶标板上包被了包被抗体JN2011‑01，合适的浓度下最大限度捕获SEA；洗板3次，洗去未结合的包被抗体，加入封闭液200μL封闭板孔上多余结合位点；洗板3次，加入样品及对照，37℃孵育1h；洗板3次，加入酶标抗体JN2011‑02‑HRP，37℃孵育1h；洗板4次，加入显色液显色12min；样品中SEA浓度≥0.5ng/mL，样品中SEA被包被抗体JN2011‑01捕获并与酶标抗体JN2011‑02‑HRP结合，并催化底物在450nm产生吸收值，被判定为阳性；样品中SEA浓度＜0.5ng/mL，样品中SEA不被包被抗体JN2011‑01捕获或者捕获数量太小不足以引起足够的信号，被判定为阴性。