一种热敏磷酸酶的过量表达、纯化和表征

摘要

本发明提供了碱性磷酸酶的组合物以及过量表达和纯化热敏南极磷酸酶(TAP)的方法。TAP的应用包括核酸、糖、肽和蛋白的去磷酸化。在这里描述的TAP与其它来源的磷酸酶相比具有优势，例如在65摄氏度时的热敏性和在接近中性pH时去磷酸活性的效率方面。

主权项

用于增加可溶性热敏性南极磷酸酶的产量的方法，包括(a)将与一段表达组氨酸标记的序列相融合的截短的热敏性南极磷酸酶基因有效连接到T7启动子上；(b)转化到宿主细胞中；(c)过量表达热敏性南极磷酸酶；其中所述热敏性南极磷酸酶基因编码具有N末端和C末端的热敏性南极磷酸酶蛋白，其中所述热敏性南极磷酸酶蛋白在所述N末端被截短，所述N末端的信号序列取代为与之相连的组氨酸标记，其中在所述N末端的截短对应于信号序列的去除；和(d)与来自所述宿主细胞的裂解液的多次超高速离心的产量相比，在不包括镍柱的柱色谱之后，获得的可溶性热敏性南极磷酸酶的产量增加。