一种提高小菘菜游离小孢子胚胎发生率的方法

摘要

本发明公开了一种提高小菘菜游离小孢子胚胎发生率的方法，选取小菘菜单核靠边期的花蕾，消毒后分离纯化出小孢子，将纯化后的小孢子悬浮于高糖培养基中，调整小孢子的密度达到1×105～1×106个/ml，置于33℃-35℃下黑暗处理12h-24h，离心弃上清后，加入低糖培养基，获得小孢子悬浮液。小孢子悬浮液于黑暗处理10d-14d后即可出现肉眼可见的胚状体，将其置于振荡培养箱中培养，出现子叶型胚后立即放于光照下转绿，然后接到分化培养基上继代进而形成再生植株。通过本发明改良后的小孢子培养方法，使对常规培养没有反应的小菘菜品种产生了胚状体，诱导基因型成功率达到60％。

主权项

一种提高小菘菜游离小孢子胚胎发生率的方法，其特征在于选取小菘菜单核靠边期的花蕾，消毒后分离纯化出小孢子，将纯化后的小孢子悬浮于高糖培养基中，调整小孢子的密度达到1×105~1×106个/ml，置于33℃~35℃下黑暗处理12h~24h，离心弃上清后，加入低糖培养基，获得小孢子悬浮液；其中，所述的高糖培养基是在1/2NLN培养基中加入15%~17%蔗糖及0.8mg/L~1.0mg/L秋水仙碱，再经0.22μm的微孔滤膜抽滤灭菌所得，pH为6.0；所述的低糖培养基是在1/2NLN培养基加入10~13%蔗糖及0.5~0.8g/L 活性炭，再经0.22μm的微孔滤膜抽滤灭菌所得，pH为6.0；其中，所述的小菘菜基因型为极乐天；所述的小孢子悬浮液于黑暗处理10d~14d后即可出现肉眼可见的胚状体，将其置于振荡培养箱中培养，当出现子叶型胚后立即放于光照下转绿，然后接到分化培养基上继代进而形成再生植株；所述的分化培养基是在B5基本培养基中加入10~13%蔗糖、0.1~0.3mg/L 6~BA、0.01~0.03mg/LNAA、0.6~0.9％琼脂以及0.4~0.7g/L活性炭，灭菌所得, pH为5.8。