一种麦芽糊精底物特异性提高的环糊精糖基转移酶及其制备方法

摘要

本发明公开了一种麦芽糊精底物特异性提高的环糊精糖基转移酶及其制备方法，属于遗传工程和酶工程领域。本发明通过对于软化类芽孢杆菌(Peanibacillus macerans)来源的的CGTase第47位的赖氨酸，第89位的酪氨酸，第94位的天冬酰胺和第196位的天冬氨酸分别突变成亮氨酸K47L，苯丙氨酸Y89F，脯氨酸N94P和酪氨酸D196Y，使AA-2G产量分别提高了30.7%，10.9%，10.0%和31.7%。对以上突变株进行复合突变，获得双突变体K47L/Y89F，K47L/N94P，K47L/D196Y，Y89F/N94P，Y89F/D196Y，N94P/D196Y，三点突变体K47L/Y89F/N94P，K47L/Y89F/D196Y，K47L/N94P/D196Y，Y89F/N94P/D196Y及四点突变体K47L/Y89F/N94P/D196Y。它们利用麦芽糊精为糖基供体生产AA-2G的产量分别提高了42.6%，11.0%，37.6%，43.6%，43.6%，41.6%，44.5%，50.5%，20.8%，35.6%及64.4%。这些突变株比野生型CGTase更利于利用麦芽糊精为糖基供体生产AA-2G。

主权项

一种麦芽糊精底物特异性提高的环糊精糖基转移酶，其特征在于在Genbank AF047363.1所示的环糊精葡萄糖基转移酶基因基础上，第47位的赖氨酸突变为亮氨酸，第89位的酪氨酸突变为苯丙氨酸，第94位的天冬酰胺突变为脯氨酸、第196位的天冬氨酸突变为酪氨酸或将其组合。