一种酵母表达的长效重组人组织因子途径抑制物

摘要

本发明属生物技术领域，涉及长效组织因子途径抑制物(LTFPI)的高效表达。经对LTFPI序列中的糖基化位点和C末端中4个与受体低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)结合中发挥重要作用的位点进行突变，根据酵母利用密码子的偏爱性对突变后的蛋白编码基因进行系列优化，采用重叠PCR方法，获得优化后的LTFPI基因。与真核表达载体重组，转化毕赤酵母，筛选高表达毕赤酵母工程菌株。经发酵、诱导表达、收集上清、浓缩、离子交换和肝素亲和层析纯化获得高纯度的LTFPI，活性测定显示该LTFPI具有良好的抗凝功能。可进一步制备抗凝血药物。

主权项

一种酵母表达的长效重组人组织因子途径抑制物，其特征在于通过下述方法制备：对长效组织因子途径抑制物LTFPI糖基化位点和羧基端位点进行突变；将LTFPI的117、167和228位天冬酰氨替换为谷氨酰胺，将174位点的丝氨酸和175的苏氨酸替换为丙氨酸，将241、254、260和261位点的赖氨酸替换为丙氨酸，突变后的TFPI的氨基酸序列如序列2所示。