| 摘要 |
Test diagnostyczny do identyfikacji lekoopornosci szczepów bakteryjnych sklada sie z membrany nitrocelulozowej typu Lateral Flow nasaczonej punktowo roztworem bialka wiazacego biotyne w ilosci od 0,0005 mg/mm2 do 0,1 mg/mm2 zawieszonego w 10% roztworze wodnego etanolu oraz reagenta detekcyjnego zawierajacego 25?g nanoczastek Au sprzeganych kowalencyjnie z sonda hybrydyzacyjna z aktywowana grupa tiolowa w ilosci 1-10 nmoli z 1-10 pmolami sondy hybrydyzacyjnej znakowanej biotyna. Sposób wytwarzania testu diagnostycznego do identyfikacji lekoopornosci szczepów bakteryjnych polega na tym, ze w pierwszym etapie membrane nitrocelulozowa typu Lateral Flow nasacza sie punktowo roztworem bialka wiazacego biotyne w ilosci od 0,0005 mg/mm2 do 0,1 mg/mm2 zawieszonego w 10% roztworze wodnego etanolu, w drugim etapie prowadzi sie inkubacje nanoczastek Au o stezeniu 25 ug/ml z sonda hybrydyzacyjna z aktywowana grupa tiolowa zawierajaca od 1 do 10 nmoli oligonukleotydu, po zakonczeniu sprzegania nanoczastki Au poddaje sie koncentracji w procesie wirowania 14400 x g przez 30 minut, odrzuca sie supernatant a osad zawiesza sie w 100 ?l - 200 ?l dejonizowanej wody destylowanej, nastepnie roztwór ponownie poddaje sie koncentracji, osad nanoczastek Au zawiesza sie w 99 - 199 ?l dejonizowanej wody destylowanej i dodaje sie 1 ?l roztworu biotynylowanej sondy hybrydyzacyjnej zawierajacej 1-10 pmoli oligonukleotydu, po czym w trzecim etapie do 2-30 ?l reagenta detekcyjnego dodaje sie 10 ?l gestej hodowli bakteryjnej, mieszanine reakcyjna umieszcza sie w lazni wodnej w temperaturze 90-100°C w czasie 5-15 min, nastepnie pozostawia sie do ostygniecia do temperatury pokojowej i 10-20 ?l mieszaniny reakcyjnej przenosi sie na membrane z immobilizowanym bialkiem wiazacym biotyne. |
