发明名称 可结合血管内皮细胞生长因子及胎盘生长因子的重组蛋白及其制备方法与应用
摘要 本发明属于生物技术-重组基因工程领域。本发明公开了可结合血管内皮细胞生长因子(VEGF)及胎盘生长因子(PLGF)的重组蛋白及其制备方法与应用。该重组蛋白的特征在于其N-端中含有可结合VEGF及PLGF的免疫球蛋白样结构区,而其C-端的最后2至20个氨基酸序列中含有至少一对由pro及cys相邻排列的俩氨基酸。本发明的重组蛋白可作为VEGF/PLGF的拮抗剂,广泛用于实验研究及临床上早期干预或治疗各种与血管增生有关的疾病如恶性肿瘤的发生与转移等。
申请公布号 CN101486760B 申请公布日期 2013.05.15
申请号 CN200810019159.2 申请日期 2008.01.15
申请人 苏州思坦维生物技术有限责任公司 发明人 周群敏;徐一清;罗师平;周青;胡红群;谢凤娟
分类号 C07K14/71(2006.01)I;C07K1/13(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I;G01N33/68(2006.01)I;A61K38/17(2006.01)I;A61P7/00(2006.01)I 主分类号 C07K14/71(2006.01)I
代理机构 上海浦一知识产权代理有限公司 31211 代理人 王函
主权项 一种可结合血管内皮细胞生长因子VEGF及胎盘生长因子PLGF的重组蛋白,其特征在于该重组蛋白的N‑端中含有VEGF受体的胞膜外免疫球蛋白样结构区,而其C‑端的最后2至20个氨基酸序列中含有至少一对由pro脯氨酸及cys半胱氨酸相邻排列的双氨基酸;该重组蛋白为由相同的俩个单体蛋白通过其C‑端的cys形成的二巯键而形成双聚体,其中每一单体蛋白的N‑端含有VEGF受体Flt‑1的胞膜外结构区中的第2及第3免疫球蛋白样区,该重组蛋白称为重组蛋白F2F3‑PC;或者该重组蛋白为由相同的俩个单体蛋白通过其C‑端的cys形成的二巯键而形成双聚体,其中每一单体蛋白的N‑端含有VEGF受体Flt‑1的胞膜外结构区中的第2免疫球蛋白样区及VEGF受体KDR的胞膜外结构区中的第3免疫球蛋白样区,该重组蛋白称为重组蛋白F2K3‑PC;或者该重组蛋白为由重组蛋白F2F3‑PC单体与重组蛋白F2K3‑PC单体聚合而成的异源二聚体;编码人Flt1受体的胞外免疫球蛋白区D2及D3的基因片段采用RT‑PCR方法从健康人脐静脉内皮细胞中克隆获得;PCR扩增人Flt1‑D2D3基因片段的引物为:正向上游引物引物flt1‑FD2‑F‑ER,28mer:ggcggaattc att agt gat aca ggt aga及反向下游引物引物flt1‑RD3a332,33mer:gatcgcggccgc gca tgg ttt atc ata tat atg;PCR扩增人Flt1‑D2基因片段的引物为:正向上游引物flt1‑FD2‑F‑ER,28mer:ggcggaattc att agt gat aca ggt aga及反向下游引物flt1‑RD2a230:gcgggatcc tat gat tgt att ggt ttg tcg;PCR扩增人KDR‑D3基因片段的引物为:正向上游引物KDR‑FD3a221,28mer:gccgggatcc tat agg att tat gat gtg及反向下游引物KDR‑RD3a328,33mer:gatcgcggccgc gca tgg agg ttt ttc atg gac。
地址 215123 江苏省苏州市工业园区星湖街218号生物纳米园A3号楼A105室