发明名称 |
一种半成熟树突状细胞的体外制备方法 |
摘要 |
本发明公开了一种半成熟树突状细胞的体外制备方法,具体为收集小鼠骨髓细胞悬液,离心,裂解,细胞重悬于RPMI 1640完全培养基中,加入10-20μg/LrmGM-CSF、2.5-10μg/L rmIL-4和1-5mg/L Jagged-1/Fc,孵育,收集疏松贴壁细胞,用完全培养基重悬细胞,加入等剂量的rmGM-CSF、rmIL-4和Jagged-1/Fc,收集疏松贴壁细胞,第6-8d加入半剂量的rmGM-CSF和rmIL-4,等剂量Jagged-1/Fc,第10-12d收获疏松贴壁细胞,即semi-mature DCsJagged-1。这种细胞只用Jagged-1/Fc处理,能导致同种异基因淋巴细胞免疫应答的能力减弱,有利于诱导免疫耐受。 |
申请公布号 |
CN102154199B |
申请公布日期 |
2013.05.15 |
申请号 |
CN201110032089.6 |
申请日期 |
2011.01.29 |
申请人 |
暨南大学 |
发明人 |
邢飞跃;于哲;刘静 |
分类号 |
C12N5/077(2010.01)I;C12N5/0784(2010.01)I |
主分类号 |
C12N5/077(2010.01)I |
代理机构 |
广州市华学知识产权代理有限公司 44245 |
代理人 |
裘晖;陈燕娴 |
主权项 |
一种半成熟树突状细胞的体外制备方法,其特征在于包括以下步骤:(1)冰浴上收集小鼠骨髓细胞悬液,离心弃上清;(2)将步骤(1)离心得到的细胞重悬于磷酸缓冲液中,加入细胞悬液体积15‑20倍的红细胞裂解液,37.0℃避光作用8‑10min,然后离心;(3)将步骤(2)离心得到的细胞重悬于含10%胎牛血清的RPMI 1640完全培养基中;(4)在步骤(3)得到的细胞悬液中加入10‑20μg/L重组小鼠粒细胞‑巨噬细胞集落刺激因子rmGM‑CSF、2.5‑10μg/L重组小鼠白细胞介素4rmIL‑4和1‑5mg/L重组嵌合蛋白Jagged‑1/Fc;(5)置于培养箱中孵育;(6)隔天1次,重复以下操作:去除上层悬浮细胞,收集疏松贴壁细胞,离心弃上清,用含10%胎牛血清的RPMI 1640完全培养基重悬离心得到的细胞,加入同步骤(4)等剂量的rmGM‑CSF、rmIL‑4和Jagged‑1/Fc,然后置于培养箱中继续孵育;(7)第6‑8天开始,加入与步骤(4)相比半剂量的rmGM‑CSF和rmIL‑4,Jagged‑1/Fc剂量不变,其余同步骤(6);(8)第10‑12天弃底层牢固贴壁细胞,收获疏松贴壁细胞,即Jagged‑1诱导的半成熟树突状细胞。 |
地址 |
510632 广东省广州市黄埔大道西601号 |