产河豚毒素的堀越氏芽孢杆菌及其分离方法与应用

摘要

产河豚毒素的堀越氏芽孢杆菌及其分离方法与应用，涉及一种堀越氏芽孢杆菌。提供一种产河豚毒素的堀越氏芽孢杆菌及其分离方法与用途。产河豚毒素的堀越氏芽孢杆菌命名为堀越氏芽孢杆菌(Bacillus horikoshii)S184。去除河豚鱼表面脏物，解剖河豚鱼，取出各器官并分别称重，分开放入无菌的容器中；在无菌条件下，分别在盛有各器官的容器中加入生理盐水，研磨，即获得了浓度为10°的各器官匀浆液，然后分别对各器官匀浆液，用无菌海水稀释，得悬液，再均匀涂布于培养基上培养；每天观察菌落形态、大小及颜色差异，挑取形态不一致的菌落并在新的培养基上划线纯化，直到长出形态单一的菌落为止。

主权项

河豚毒素的合成方法，其特征在于其具体步骤如下：将堀越氏芽孢杆菌Bacillus horikoshii S184经琼脂培养基活化后，接于种子培养基，培养后，接种于新的发酵培养基，摇床培养，即得到含河豚毒素的发酵液；所述产河豚毒素的堀越氏芽孢杆菌命名为堀越氏芽孢杆菌(Bacillus horikoshii)S184，已于2009年09月07日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，登记入册编号为CGMCC No.3266；所述种子培养基是采用Zobell 2216E种子培养基，所述培养的时间为20～30h，所述接种于新的发酵培养基，摇床培养，是以体积百分比为1％～10％的接种量接种于Zobell 2216E发酵培养基，转速为150～200r/min，在20～30℃下摇床培养20～30h；所述Zobell 2216E发酵培养基的组成为：蛋白胨0.5～10g，酵母膏0.5～1g，磷酸盐0～0.1g，柠檬酸铁0.1g，NaCl 10～50g，MgCl2 5.9g，Na2SO4 3.24g，CaCl2 1.8g，KCl 0.55g，NaHCO3 0.16g，KBr 0.08g，SrCl2 0.034g，H3BO3 0.022g，Na2SiO3 0.004g，NaF 0.0024g，NH4NO3 0.0016g，Na2HPO4 0.008g，水1000ml，pH5～8。