一种酶合成胸腺五肽的方法

摘要

本发明公开了一种酶合成胸腺五肽的方法。本发明以木瓜蛋白酶为催化剂、在乙酸乙酯-水中合成胸腺五肽，工艺简单，提高了胸腺五肽的合成效率，酶的利用率高，生产成本低；产品容易回收，不会造成化学污染，具有重要的社会意义和巨大的市场前景。在乙酸乙酯-水中合成胸腺五肽，反应条件温和；立体专一性强，避免了在化学法合成中存在的产物消旋问题；不用侧链保护基，无副反应；有机底物在有机溶剂中比在水中溶解性好，而酶不溶于有机介质，因此酶易于回收；酶在有机溶剂中比在水中更稳定，不存在由于微生物污染而使酶失活的问题。

主权项

一种酶合成胸腺五肽的方法，其特征在于包括如下步骤：（1）叔丁氧羰基‑缬氨酸‑酪氨酸‑甲酯二肽的合成：将0.2～0.8mol/L pH5.0～8.0三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲液加入乙酸乙酯中，搅拌均匀，然后按质量比4～10：40～55：20～35依次加入木瓜蛋白酶、叔丁氧羰基‑缬氨酸和酪氨酸‑甲酯，于30～60℃反应12～48h，得到叔丁氧羰基‑缬氨酸‑酪氨酸‑甲酯二肽；（2）[叔丁氧羰基‑精氨酸（2,2,4,6,7‑五甲基苯并呋喃‑5‑磺酰基）‑赖氨酸‑甲酯]二肽的合成：将0.6～1.2mol/L pH4.0～7.0三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲液加入乙酸乙酯中，搅拌均匀，然后按质量比4～10：45～55：40～55依次加入木瓜蛋白酶、[叔丁氧羰基‑精氨酸(2,2,4,6,7‑五甲基苯并呋喃‑5‑磺酰基)]和赖氨酸‑甲酯，于30～60℃反应36～72h，得到[叔丁氧羰基‑精氨酸（2,2,4,6,7‑五甲基苯并呋喃‑5‑磺酰基）‑赖氨酸‑甲酯]二肽；（3）[叔丁氧羰基‑精氨酸（2,2,4,6,7‑五甲基苯并呋喃‑5‑磺酰基）‑赖氨酸‑天冬氨酸‑甲酯]三肽的合成：将0.2～0.8mol/L pH5.0～8.0三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲液加入乙酸乙酯中，搅拌均匀，然后按质量比3～10：2～7：4～10依次加入木瓜蛋白酶、[叔丁氧羰基‑精氨酸（2,2,4,6,7‑五甲基苯并呋喃‑5‑磺酰基）‑赖氨酸]和天冬氨酸‑甲酯，于30～60℃反应36～72h，得到[叔丁氧羰基‑精氨酸（2,2,4,6,7‑五甲基苯并呋喃‑5‑磺酰基）‑赖氨酸‑天冬氨酸‑甲酯]三肽；（4）精氨酸‑赖氨酸‑天冬氨酸‑缬氨酸‑酪氨酸五肽的合成：将0.2～0.8mol/LpH5.0～8.0三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲液加入乙酸乙酯中，搅拌均匀，然后按质量比2～6：4～10：4～10依次加入木瓜蛋白酶、[叔丁氧羰基‑精氨酸（2,2,4,6,7‑五甲基苯并呋喃‑5‑磺酰基）‑赖氨酸‑天冬氨酸]和缬氨酸‑酪氨酸‑甲酯，于30～60℃反应36～72h，得到混合物；将混合物处理后，得到精氨酸‑赖氨酸‑天冬氨酸‑缬氨酸‑酪氨酸五肽。