一种基因组多拷贝基因拷贝数的快速批量测定方法

摘要

本发明公开了一种基因组多拷贝基因拷贝数的快速批量测定方法，一种利用PCR技术对基因组多拷贝基因拷贝数的快速批量测定方法，本方法通过对同一组织DNA样本分别实施某些多拷贝基因和某已知单拷贝基因的PCR扩增并纯化产物，测定各基因PCR纯化产物的质量浓度后根据其核酸序列，将质量浓度换算成摩尔浓度，再分别以梯度稀释后的PCR产物以及组织DNA样本为模板通过同一RT-PCR反应制作这些基因的标准曲线同时获得各基因在DNA样品中的浓度，由于在同一抽提效率下，多拷贝基因的拷贝数就是在相同体积下多拷贝基因的数量除以单拷贝基因的数量，由此可以利用一次96孔RT-PCR反应测定同一生物个体中7个不同多拷贝基因的拷贝数；也可以利用一次384孔RT-PCR反应测定11个不同多拷贝基因的拷贝数，实现快速批量的测定效率。

主权项

一种基因组多拷贝基因拷贝数的快速批量测定方法，利用PCR技术对基因组多拷贝基因的拷贝数的快速批量测定方法，第一步，抽提待测生物个体DNA样品，对需测定的多拷贝基因(X1、X2、X3……Xn)和作为内参已知单拷贝基因(Y)进行PCR扩增引物设计；第二步，以个体DNA样品为模板对各基因(X1、X2、X3……Xn、Y)进行PCR扩增，并对PCR产物纯化；第三步，测定各基因的PCR纯化产物的质量浓度，并根据其核酸序列，将质量浓度换算成摩尔浓度，分别为M1、M2、M3......Mn、MY；第四步，分别对各基因的PCR纯化产物进行梯度稀释；第五步，分别以梯度稀释后各基因的PCR纯化产物和组织DNA样本作为模板，通过同一RT‑PCR反应制作这些基因的标准曲线，同时获得在组织DNA样品中各基因的含量(Ct值)；第六步，通过各个基因的标准曲线和组织DNA样品中各基因的表达量，计算出各基因的摩尔浓度m1、m2、m3……mn、mY，；第七步，根据在同一组织DNA样品中多拷贝基因的数量是单拷贝基因的拷贝数的倍数关系，通过一套方程组联解得到所测基因在基因组中的拷贝数。