用于乙型肝炎病毒四色荧光定量PCR检测的试剂盒及应用

摘要

本发明涉及生物技术领域，旨在提供一种用于乙型肝炎病毒四色荧光定量PCR检测的试剂盒及应用。本发明针对病毒S区序列设计扩增引物和4条特异性探针：定量探针，对应A-H型的保守区，用来定量总DNA；C型探针，对应C型特有序列，用来检测HBV基因型C型；YVDD探针，对应YVDD（GTG）突变位点；YIDD探针，对应YIDD（ATT）突变位点。试剂盒反应体系包含由特异性引物和探针配制的检测混合液、Taq酶、阴性和阳性对照。本发明用于检测的整个过程小于3小时，效率高，成本低，灵敏度和准确度高，能有效监测乙肝患者病毒载量和服用核苷类药物的疗效。

主权项

用于乙型肝炎病毒四色荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于，该试剂盒含有两种引物及四种探针，各引物或探针的名称、DNA序列和荧光标记分别为：上游引物：5’‑GCACTTGTATTCCCATCCCATCAT‑3’；nt645‑662, 18bp；下游引物：5’‑AGCAAAGCCCAAAAGACCCACAAT‑3’；nt982‑1005, 24bp, antisense；定量探针5’‑ROX‑TCTGTACAACATCTTGAGTCCCTT‑BHQ2‑3’；nt768‑791, 24bp；C型探针5’‑CY5‑TRAACCCTAATAAAACCAAACGTTGG‑BHQ2‑3’；nt836‑861, 26bp；YVDD探针5’‑VIC‑ CATCATCCACATARC‑MGB‑3’；nt751‑765, 15bp, antisense；YIDD探针5’‑NED‑CCACATCATCAATATA‑MGB‑3’；nt754‑769, 16bp, antisense。