检测表皮生长因子受体基因外显子19缺失突变和外显子21点突变的方法

摘要

本发明公开了一种检测表皮生长因子受体基因外显子19缺失突变和外显子21点突变的方法，该方法在同一个反应体系中进行酶切富集PCR反应和ARMS荧光定量PCR反应来分别检测E746_A750del缺失突变和L858R点突变，其将酶切突变富集PCR和ARMS荧光定量PCR整合在一起，通过有效的温度和时间控制，经一个反应程序即可完成酶切突变富集和ARMS荧光定量PCR反应。

主权项

一种检测表皮生长因子受体基因外显子19缺失突变E746_A750del和外显子21点突变L858R的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：（1）酶切富集PCR体系，所述酶切富集PCR体系包括限制性内切酶Msel和Mscl；以及富集引物，所述富集引物为：E746_A750del上游引物：5’‑CTTCCAAATGAGCTGGCAAGTGC‑3’E746_A750del下游引物：5’‑TGGACCCCCACACAGCAAAGC‑3’L858R上游引物：5’‑CTGCAGAACTTGACCCCTCCCA‑3’L858R下游引物：5’‑GGAAAATGCTGGCTGACCTAAAGC‑3’；（2）ARMS荧光定量PCR体系，所述ARMS荧光定量PCR体系包括Taqman探针和ARMS引物，其中所述的ARMS引物为：E746_A750del上游引物：5’‑AATTCCCGTCGCTATCAAAAC‑3’E746_A750del下游引物：5’‑ACCCCCACACAGCAAAGC‑3’L858R上游引物：5’‑GTCAAGATCACAGATTTTGCGCG‑3’L858R下游引物：5’‑GGAAAATGCTGGCTGACCTAAAG‑3’，所述的Taqman探针序列为：E746_A750del探针：5’‑FAM‑CCAACAAGGAAATCCTCGATGTGAGTTTCTG‑TAMRA‑3’，L858R探针：5’‑ FAM‑TTCTTTCTCTTCCGCACCCAGCAGT‑ TAMRA‑3’。