一种菊花CVB和CChMVd病毒的二重RT-PCR检测方法

摘要

本发明公开了一种菊花CVB和CChMVd病毒的二重RT-PCR检测方法，属于分子生物学的病毒检测领域，该方法包括：（1）从菊花植株取样并提取总RNA；（2）分别针对CVB和CChMVd病毒设计两对特异性引物：CVB-F，CVB-R；CChMVd-F，CChMVd-R；（3）以随机六聚体为引物进行反转录得到两种cDNA；（4）利用RT-PCR技术扩增所述cDNA，将扩增的产物进行琼脂糖凝胶电泳，得到665bp特异性片段表示感染CVB，得到206bp特异性片段表示感染CChMVd。本发明提供的检测方法可同时检测被CVB和CChMVd复合侵染的病株，检测特异性强，灵敏度高，工序简单，节约成本。

主权项

一种菊花CVB和CChMVd病毒的二重RT‑PCR检测方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）从菊花植株取样并提取总RNA；（2）分别针对CVB和CChMVd病毒设计两对特异性引物：CVB‑F，CVB‑R；CChMVd‑F，CChMVd‑R；其中：CVB‑F：5’‑ACCGAATTCTTAGTCACAATGCCTCCC‑3’，CVB‑R：5’‑TCCGAGCTCATAGAGACGGCATACCTT‑3’；CChMVd‑F：5’‑CAGTTTCGGCTTGTGCGGGAGT‑3’，CChMVd‑R：5’‑TCCGAGGAGAATATCCAACGAG‑3’；（3）以随机六聚体为引物进行反转录得到两种cDNA； （4）利用RT‑PCR技术扩增所述cDNA，将扩增的产物进行琼脂糖凝胶电泳，得到665bp特异性片段表示感染CVB，得到206bp特异性片段表示感染CChMVd。