羊独立生长因子1B的多克隆抗体的获取方法

摘要

本发明公开了一种羊独立生长因子1B的多克隆抗体的获取方法，利用设计的特异性引物GFI-1将羊独立生长因子1B基因进行PCR扩增，获得它的CDS序列；并通过特异性引物GFI-2来酶切，并构建原核表达载体，获得原核表达载体pET32a-GFI1B；再将原核表达载体pET32a-GFI1B进行目的基因的诱导表达，获得羊独立生长因子1B蛋白；将羊独立生长因子1B蛋白纯化至85%以上；将纯化后的羊独立生长因子1B蛋白免疫到动物上，在最后一次免疫的一周后采全血并分离血清；将血清纯化后，获得目的羊独立生长因子1B基因的多克隆抗体。

主权项

一种羊独立生长因子1B的多克隆抗体的获取方法，其特征在于：利用设计的特异性引物GFI‑1将羊独立生长因子1B基因进行PCR扩增，获得它的CDS序列；并通过特异性引物GFI‑2来酶切，并构建原核表达载体，获得原核表达载体pET32a‑ GFI1B；再将原核表达载体pET32a‑ GFI1B进行目的基因的诱导表达，获得羊独立生长因子1B蛋白；将羊独立生长因子1B蛋白纯化至85%以上；将纯化后的羊独立生长因子1B蛋白免疫到动物上，在最后一次免疫的一周后采全血并分离血清；将血清纯化后，获得目的羊独立生长因子1B的多克隆抗体；特异性引物GFI‑1包括上游引物：5 '‑­­­ATGCCACGCTCCTTCCTGGT‑3及下游引物：5'‑ TCACTTGAGGTTGTGCTGGCT‑ 3’；特异性引物GFI‑2包括上游引物：5'‑GGATCCATGCCACGCTCCTTCCT‑3'；下游引物：5'‑GAATTCTCACTTGAGGTTGTGCTGGC‑3' 。