南方菜豆花叶病毒的RT-LAMP检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明公开了南方菜豆花叶病毒的RT-LAMP检测试剂盒及检测方法，检测试剂盒包括2×反应缓冲液、BstDNA聚合酶液、内侧上游引物、内侧下游引物、外侧上游引物、外侧下游引物、钙黄绿素荧光染料，检测方法通过样品总RNA提取，RT-LAMP扩增，就可以得到检测结果，整个检测反应1.5h内即可完成，通过4条引物识别靶基因6段不同的序列，提高了检测的特异性，25μL体系中总RNA含量为2pg也能灵敏检测，其灵敏度比普通RT-PCR检测高10倍，且无需复杂的检测仪器和检测过程，反应结束后在自然光照条件下裸眼观察颜色变化，判定结果，不需进行后处理，避免了开盖污染，操作简单，可现场实时快速检测。

主权项

南方菜豆花叶病毒的RT‑LAMP检测试剂盒，该检测试剂盒包括2×反应缓冲液，浓度8U/μL的Bst DNA聚合酶液，浓度为20μM的内侧上游引物、内侧下游引物、外侧上游引物和外侧下游引物，钙黄绿素荧光染料，所述2×反应缓冲液与Bst DNA聚合酶液、内侧上游引物、内侧下游引物、外侧上游引物、外侧下游引物、钙黄绿素荧光染料的体积比为12.5：1：2：2：0.25：0.25：1，其特征在于所述内侧上游引物的核苷酸序列为CGCCAACAGC CGTTGTGAAA TCGTTGGACA GCTTGGCAAG A，所述内侧下游引物的核苷酸序列为TGGTCCCGGC GAGGCTTATA AGCGTCCAGT ACTCACAGC，所述外侧上游引物的核苷酸序列为ACGGCCAATG CTATCACG，所述外侧下游引物的核苷酸序列为GCAGTGGGCT CTATCAGTTG。