一种低分子量麦谷蛋白亚基的提取分离鉴定方法

摘要

本发明公开了一种低分子量麦谷蛋白亚基的提取分离鉴定方法。该分离麦谷蛋白亚基的方法，包括如下步骤：将待分离的麦谷蛋白进行双向电泳，得到分离的麦谷蛋白亚基；所述双向电泳中，进行电泳的上样液是用含有DTT的水合上样缓冲液溶解所述待分离的麦谷蛋白得到的。本发明方法具体的提供了适合双向电泳的低分子量麦谷蛋白的提取和适合质谱鉴定的蛋白质胶内酶切的技术方案，解决了小麦低分子量麦谷蛋白亚基的分离鉴定技术问题，也为同类型新的蛋白的分离鉴定提供了一种切实有效的方法，因此，本发明方法适合于推广应用。

主权项

一种分离麦谷蛋白亚基的方法，包括如下步骤：将待分离的麦谷蛋白进行双向电泳，得到分离的麦谷蛋白亚基；所述双向电泳中，进行电泳的上样液是用含有DTT的水合上样缓冲液溶解所述待分离的麦谷蛋白得到的；所述待分离的麦谷蛋白是按照包括如下步骤的方法提取得到的：(1)从待提取物质中提取总蛋白；(2)从步骤(1)得到的蛋白中去除醇溶蛋白；(3)再用麦谷蛋白提取缓冲液从步骤(2)得到的蛋白中提取麦谷蛋白，得到麦谷蛋白；所述麦谷蛋白提取缓冲液由异丙醇、Tris‑HCl缓冲液、DTT和水组成；所述待分离的麦谷蛋白的提取方法中，在所述步骤(1)之前，包括如下步骤：用TCA的丙酮溶液浸泡所述待提取物质，离心，收集沉淀，从沉淀中提取总蛋白；所述水合上样缓冲液由尿素、硫脲、CHAPS、DTT、pH值为3‑10的IPG buffer、pH值为6‑11的IPG buffer和水组成；每升所述麦谷蛋白提取缓冲液由500ml异丙醇、12.5ml pH值为8.0的1MTris‑HCl缓冲液、65mmol DTT和水组成；所述TCA的丙酮溶液中，TCA的质量百分含量为10％；所述浸泡的温度为‑20℃，所述浸泡的时间为2小时。