家族3纤维素结合域在真核生物中作为重组蛋白质表达和纯化的亲和标签的应用

摘要

本发明属于重组蛋白表达纯化领域。本发明提供利用家族3纤维素结合域CBM3作为重组蛋白质表达的亲和标签在真核生物中表达和纯化重组蛋白的方法，所述方法包括下列步骤：(1)构建所述真核生物密码子优化的编码CBM3的核苷酸序列；(2)构建步骤(1)中的所述真核生物密码子优化的编码CBM3的核苷酸序列与编码目标蛋白的核苷酸序列的重组构建体；(3)将步骤(2)中构建的所述重组构建体克隆到适于在所述真核生物中表达的表达载体中；(4)将步骤(3)中获得的重组表达载体在所述真核生物中进行表达；和(5)以CBM3作为亲和标签，利用纤维素纯化所表达的重组蛋白。本发明还提供利用CBM3作为重组蛋白质表达的亲和标签结合内蛋白子在真核生物中表达和纯化重组蛋白的方法，所述方法包括构建目标蛋白-内蛋白子-CBM3重组构建体，从而将融合表达的重组蛋白无外额外氨基酸的切出及纯化。

主权项

利用家族3纤维素结合域CBM3作为重组蛋白质表达的亲和标签在酵母中表达和纯化重组蛋白的方法，所述方法包括下列步骤：(1)构建所述酵母密码子优化的编码CBM3的核苷酸序列；(2)构建步骤(1)中的所述酵母密码子优化的编码CBM3的核苷酸序列与编码目标蛋白的核苷酸序列的重组构建体；(3)将步骤(2)中构建的所述重组构建体克隆到适于在所述酵母中表达的表达载体中；(4)将步骤(3)中获得的重组表达载体在所述酵母中进行表达；和(5)以CBM3作为亲和标签，利用纤维素纯化所表达的重组蛋白，其中所述家族3纤维素结合域CBM3来源于热纤维梭菌(Clostridiumthermocellum)，其经过酵母密码子优化后的编码核苷酸序列为SEQ IDNO：3。