铜绿微囊藻替代叶绿素标准物质快速实时测定水体叶绿素的方法

摘要

本发明公开了一种利用铜绿微囊藻替代叶绿素标准物质快速实时测定水体叶绿素的方法，该方法包括如下步骤：A.铜绿微囊藻叶绿素ａ标准溶液的制备；B.储备液中叶绿素ａ浓度的测定，用国标法标定储备液中叶绿素ａ的浓度；C.储备液荧光测定，分别测定各溶液的荧光强度；D.铜绿微囊藻标准荧光曲线的建立，将储备液的浓度对其荧光强度作图绘制铜绿微囊藻叶绿素ａ荧光法曲线；E.铜绿微囊藻校正荧光曲线的建立。根据所建立的铜绿微囊藻藻液荧光强度和叶绿素ａ浓度之间的校正曲线，只需采用荧光仪直接测出水样的荧光强度，便可实时、快速得到叶绿素ａ的浓度。

主权项

1.铜绿微囊藻替代叶绿素标准物质快速实时测定水体叶绿素的方法，其特征步骤包括：A、铜绿微囊藻叶绿素ａ标准溶液的制备取铜绿微囊藻液，抽滤，抽滤完毕后取下滤膜，将滤膜夹在滤纸中冷冻，反复冻融，使细胞完全裂解以利于叶绿素a的提取；将滤膜放入比色管中，加入95%乙醇定容，放入4℃冰箱中静置，然后以4000r/min离心15min,将上清液分别转移至容量瓶中用95%乙醇定容；作为储备液备用；B、储备液中叶绿素ａ浓度的测定用国标法标定储备液中叶绿素ａ的浓度，以相应的95%乙醇作为空白，用紫外分光光度计测定储备液扫描波长在750nm、664nm、645nm和630nm处的吸光值，将测得的结果数据带入国标法计算公式：其中chla为叶绿素a的浓度，单位ug/l；E750、E664、E645、E630分别为储备液于波长750nm、664nm、645nm、630nm处的吸光值；V_乙醇为乙醇萃取液的体积，单位ml；V_水样为藻液体积，单位l；＆为比色皿光程，单位cm；通过计算即获得储备液中叶绿素a的浓度chla；C、储备液荧光测定步骤B已经计算出储备液中叶绿素a的浓度chla，取适量上述储备液依次稀释成浓度为30、90、150、300、450、600、800、1000、1200、1500、1800ug/l的系列溶液，在激发波长440nm、发射波长684nm、激发与发射狭缝均为5nm条件下,以95%乙醇为空白参比，分别测定各溶液的荧光强度；D、铜绿微囊藻标准荧光曲线的建立将储备液的浓度对其荧光强度作图绘制铜绿微囊藻叶绿素ａ荧光法曲线，得到附图1，即得到铜绿微囊藻叶绿素a提取液中叶绿素ａ浓度与荧光强度的相关关系；同时计算其回归方程为y=0.1173x+7.1177，Ｒ²＝0.9947，其中，y为其荧光强度，x为叶绿素ａ浓度，单位ug/l；E、铜绿微囊藻校正荧光曲线的建立取铜绿微囊藻水样逐级稀释，配成体积各为20ml的一系列浓度梯度的溶液，然后，E-1、每一份藻液溶液各取出10ml，分别测定其荧光强度，利用步骤D获得的铜绿微囊藻标准荧光曲线即可换算为藻液溶液中叶绿素ａ的浓度；E-2、每份藻液溶液剩余的10ml不经任何处理，同条件下测定荧光强度；E-3、将步骤E-1中所得的叶绿素ａ浓度对步骤E-2中所得的荧光强度作图，即得附图3，为铜绿微囊藻藻液叶绿素ａ浓度与铜绿微囊藻液荧光强度校正曲线；同时计算其回归方程为y=0.0129x+0.4393R²=0.9936，其中y为其荧光强度值，x为叶绿素ａ浓度，单位ug/l；根据所建立的铜绿微囊藻藻液荧光强度和叶绿素ａ浓度之间的校正曲线，只需采用荧光仪直接测出水样的荧光强度，便可实时、快速得到叶绿素ａ的浓度。