一种苜蓿遗转化的方法

摘要

本发明涉及一种苜蓿遗传转化的方法，属于遗传工程技术领域，具体的说公开了一种苜蓿种子整体侵染的方法，该方法包括测成熟苜蓿种子的生理吸胀曲线；含目标基因的根癌农杆菌培养；苜蓿种子的灭菌；将经灭菌的苜蓿种子转入到OD600值为0.8-1.3的根癌农杆菌菌液中侵染8-10小时；共培养；抗性植株的筛选；抗性植株的生根及扩繁；转化植株炼苗及移栽等步骤。本发明首次采用成熟苜蓿种子作为实验材料，结合苜蓿种子生理吸胀曲线中不发生损伤的吸胀停滞点为8-10小时，在种子吸胀阶段用发根农杆菌菌液浸泡侵染种子8-10小时，大大提高了转化效率和转化植株的获得数量；经过采用压力筛选培养基对抗性植株进行的筛选，缩短了实验周期2-3个月，简化了实验过程和转化后的鉴定工作量，对苜蓿基因工程的理论研究及遗传育种实践均具有重要意义。

主权项

一种苜蓿遗传转化的方法，该方法是采用苜蓿种子整体侵染的方法实现的，步骤包括：① 测成熟苜蓿种子的生理吸胀曲线，② 含有目标基因的根癌农杆菌培养，③ 苜蓿种子消毒灭菌，④ 结合苜蓿种子的生理吸胀曲线，将经灭菌的成熟苜蓿种子转入到OD600值为0.8‑1.3的根癌农杆菌菌液中振荡侵染8‑10小时，⑤ 在25℃黑暗条件下共培养3天，⑥ 抗性植株的筛选，⑦ 抗性植株的生根及扩繁，⑧ 转化植株炼苗及移栽。