基于颜色的环介导逆转录等温扩增技术检测EV71病毒基因

摘要

本发明属于生物技术应用领域，涉及各级疾病预防控制机构，肠道病毒检测网络实验室，哨点医院等用于对以发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹为主要症状的疑似手足口病病人的咽拭子、血清、粪便等标本的人肠道病毒EV71型VP1基因的检测和监测。具体是应用基因颜色的环介导逆转录等温扩增技术(RT-LAMP)，通过生物信息学专业软件分析人肠道病毒EV71型VP1基因的保守序列，设计出六条引物完全与识别的VP1靶序列中八个结合区匹配，省略了单独的逆转录和巢式PCR的二次扩增步骤，反应前加入HNB(羟基萘酚蓝)染料，只需一步就可完成在65℃等温环境中扩增1小时，最后用肉眼观察颜色变化和管底的白色沉淀判定检测结果，与传统的RT-PCR方法比较，它具有更安全、特异、灵敏、便捷的优势。

主权项

一种非诊疗目的的手口足病病原体EV71病毒VP1基因的基于HNB颜色的环介导逆转录等温扩增检测方法，其特征在于，所述方法包括：使用以下六个引物进行扩增，并在扩增前加入HNB染料通过肉眼观察反应管中颜色变化，从而直接判定检测结果的步骤，引物F3：5’TGCGAGTGCTTATCAATGGT3’;引物B3:5’AGTTCTGGTTACGCATCGG3’;引物FIP:5’ACTGAGAACGTGCCCATCATGTATCCCACATTCGGAGAACAC3’;引物BIP:5’CTGTGGGGACCTCCAAGTCCAAGGTATCCACGCCCTGAC3’;引物loop1:5’CGTATTCAAGATCTTTCTCCTGTTT3’;引物loop2:5’AGTACCCTTTAGTGGTTAGGATT3’。