大黄鱼脂肪细胞体外培养方法

摘要

本发明公开了一种大黄鱼脂肪细胞体外培养方法，依次包括以下步骤：1）、取大黄鱼腹腔腹壁的脂肪组织；2）、将上述脂肪组织经过细胞分散处理，得大黄鱼前体脂肪细胞；3）、将大黄鱼前体脂肪细胞接入完全培养基中，吹打均匀，制成细胞悬液；完全培养基为含20%胎牛血清培养液；4）、原代培养：将细胞悬液在24～26℃条件下，培养成贴壁生长的前体脂肪细胞。待步骤4）所述的原代培养的细胞达到70～80%汇合时，可进行传代接种培养。使用本发明的方法能有效地实现大黄鱼脂肪细胞的体外培养。

主权项

大黄鱼前体脂肪细胞体外培养方法，其特征在于依次包括以下步骤：1）、取大黄鱼腹腔腹壁的脂肪组织；2）、将上述脂肪组织经过细胞分散处理，所述细胞分散处理包括以下内容：A、将脂肪组织切成小块，用含双抗的PBS缓冲液浸泡、冲洗；得冲洗后小块组织；B、将冲洗后小块组织悬浮于0.2%胶原酶II消化液中，在22～28℃恒温摇床中消化0.8～1.2小时；所述0.2%胶原酶II消化液为按照0.2g胶原酶II与100ml的PBS缓冲液相混合所得；C、在步骤B所得物中加入与0.2%胶原酶II消化液同体积的完全培养基，以中和消化液；然后依次通过220～280μm尼龙膜和80～120μm尼龙膜，收集滤液；D、将上述滤液离心，弃上清，加入PBS缓冲液冲洗；得大黄鱼前体脂肪细胞；3）、将大黄鱼前体脂肪细胞接入完全培养基中，吹打均匀，制成细胞悬液； 4）、原代培养：将细胞悬液在24～26℃条件下，培养成贴壁生长的前体脂肪细胞；所述完全培养基为含20%胎牛血清培养液。