恩诺沙星半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用

摘要

本发明提供了一种恩诺沙星半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用。本发明以恩诺沙星为原料，与氨基丁酸或氨基己酸反应生成含4个或6个碳原子手臂的半抗原；通过活泼脂法将半抗原与蛋白质偶联制备得到人工抗原；将人工抗原免疫小鼠，采用细胞融合技术制得对恩诺沙星高特异性的单克隆抗体。采用本发明单克隆抗体建立免疫检测可用于恩诺沙星现场快速检测，对实现畜禽水产品中恩诺沙星残留的快速检测具有重要现实意义。

主权项

1.一种恩诺沙星人工半抗原，其特征在于是以恩诺沙星与氨基丁酸在NHS、DDC和DMF存在条件下反应制备得到，所述半抗原含4个碳原子手臂，具有式(II)所示分子结构：其中，n为-CH₂基团数目，n＝3；所述恩诺沙星人工半抗原的制备方法，包括以下步骤：(1)按投料摩尔比为1∶1∶1将恩诺沙星、N-羟基琥珀酰亚胺和脂溶性碳二亚胺置于反应容器中，并将上述混合物用少量的DMF溶解，室温下避光搅拌过夜；(2)将经步骤(1)得到的反应物离心取上清得A液；取与恩诺沙星等摩尔量的氨基丁酸溶于少量蒸馏水中，得B液；(3)将B液缓慢加到A液中，室温搅拌过夜，离心取上清液，调上清液为碱性，将析出的沉淀过滤，收集上清液；(4)将步骤(3)制得的上清液调至酸性，收集沉淀，得到恩诺沙星半抗原。