| 摘要 |
1. Способ обнаружения, по крайней мере, одного полинуклеотида-мишени в образце, включающий:a) приведение в контакт образца, содержащего, по крайней мере, один полинуклеотид, с парой праймеров, которая специфически гибридизуеся и амплифицирует последовательность-мишень, по крайне мере, одного полинуклеотида, где пара праймеров состоит из:i) первого праймера, включающего(1) 3′-последовательность, комплементарную первой последовательности, фланкирующей последовательность-мишень полинуклеотида, и(2) 5′-метку захвата;иii) второго праймера, включающего:(1) 3′-последовательность, комплементарную второй последовательности, фланкирующей последовательность-мишень полинуклеотида, и(2) 5′-последовательность, которая обеспечивает средства для направления абскрипции;b) амплификацию последовательности-мишень с помощью первого и второго праймеров;c) приведение в контакт амплифицированной последовательности-мишени с иммобилизованной молекулой, которая связывает 5′-метку захвата, тем самым захватывая амплифицированную последовательность-мишень полинуклеотида;d) транскрипцию, по крайней мере, одного абскрипта со средства для направления абскрипции;иe) обнаружение, по крайне мере, одного абскрипта, транскрибированного на стадии d).2. Способ по п.1, в котором несвязанные реагенты, праймеры и полинуклеотиды вымывают из иммобилизованных и захваченных полинуклеотидов перед последующей стадией.3. Способ по п.1, в котором амплификация состоит в проведении полимеразной цепной реакции.4. Способ по п.3, в котором полимеразную цепную реакцию проводят с, по крайней мере, одной из термостабильной ДНК-полимеразы и термостабильной РНК-полим� |
