一种基于细胞学动态信息集成鉴别道地中药材的方法

摘要

本发明公开了一种生物学领域，具体是指一种基于细胞学动态信息集成鉴别道地中药材的方法。本发明是通过采用中药材的提取、再进行常规细胞的培养、种板到一定程度，然后进行细胞动态学检测，在检测过程中再对细胞进行给药过程，并同时进行细胞动态学检测，将所检测结果与标准道地药材的数值进行数值比较，即可得所测药材的结果。本发明的优点是利用现代分子生物学和细胞生物学为基础，结合现代信息技术，可以更快速、准确、方便地检测出同一物种因地域不同所产生的不同性质，以及方便鉴别出地哪些为地道药材、天然药物等，具有重复性好、操作方便等特点。本发明在传统中药材检测行业内具有广泛用途。

主权项

一种基于细胞学动态信息集成鉴别道地中药材的方法，其特征在于，包括下述步骤：（1）中药材提取取中药材，烘干，打粉，加蒸馏水溶解，浸泡30min， 以频率42KHz超声10min，沸水浴加热20min，10000转/分离心分离10min，取上清液备用；（2）常规细胞培养细胞培养基：选用1640培养基、DMEM /高糖、DMEM /低糖、MEM培养基、IMDM培养基、DMEM/F12培养基、或McCoy’s 5A培养基中的一种；胎牛血清、0.25%胰酶、PBS，其中PBS的制备是：按质量比例取Nacl  8份，Kcl  0.2份，KH2PO4 0.24份，Na2HPO4·12H2O  3.58份，加蒸馏水1000份，并调节pH至7.4，在121℃高温下灭菌30min后可使用；细胞培养液配方：细胞培养基加10%胎牛血清；选用贴壁细胞为细胞株，于37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养，待细胞长到密度为80%~90%，吸去培养液，加PBS润洗1~2次，再用0.25%胰酶消化细胞，直至细胞鼓起、加入细胞培养液终止消化，用细胞培养液将细胞稀释成浓度104~105个/ml，待用；（3）种板测基线：取16孔或96孔检测板，每孔加入细胞培养基，通过检测板底部连接的电子传感器，检测孔底部排列的微电极阵列的阻抗；当没有细胞时，孔底部排列的微电极阵列的阻抗分布均匀；接种细胞：将上述步骤（2）中用细胞培养液稀释好的细胞加到检测板中，细胞密度为103~104个/孔；（4）细胞动态学检测接种细胞在检测板上贴壁、生长，同时检测板底部连接的电子传感器测量其阻抗；阻抗的大小用细胞指数进行衡量，检测数据以时间为横坐标，以细胞指数为纵坐标制得动态曲线图；（5）给药待细胞长到接种后18~24小时，细胞已贴壁，将每孔的细胞培养基吸出，换成无血清培养基，培养2小时，进行给药；将步骤（1）中备用的上清液，往检测板上孔中进行给药；同时向对照孔中加灭菌的蒸馏水，并继续进行细胞动态学检测；（6）数据分析将给药前的最后一个时间点测得的细胞指数为基准，对上述步骤（5）中加了上清液的细 胞和对照孔中的细胞继续进行动态学检测，分别测得各自的阻抗值，通过所得阻抗值的对比即可得知待测中药材的性质。