牡蛎单孢子虫LAMP检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种牡蛎单孢子虫LAMP检测试剂盒，它采用环介导等温扩增(LAMP)技术，并根据牡蛎单孢子虫共有的基因保守区设计了两个特异性内引物、两个特异性外引物和两个特异性环引物。应用本发明的LAMP检测试剂盒，仅需通过对组织样品进行DNA提取并进行环介导等温扩增，即可检测出牡蛎单孢子虫，解决了现有技术检测时间长、工作量大、交叉污染、操作复杂等缺陷，具有特异性强、敏感性高、快速且成本低、操作方法更简单，特别适于基层现场快速检测牡蛎单孢子虫的需要。

主权项

一种牡蛎单孢子虫LAMP检测试剂盒，其特征在于该试剂盒含有以下试剂：反应液A：每管24ul，其组成为2.5ul 10×等温反应缓存液、1.0ul Bst DNA聚合酶8U/ul、3ul 10mM dNTPs、3ul 25mM硫酸镁、0.25ul 20uM的内引物1、0.25ul 20uM的内引物2、2ul 20uM的外引物1、2ul 20uM的外引物2、1ul 20uM的环引物1、1ul 20uM的环引物2、0.5ul 5M甜菜碱、1ul 625μM钙黄绿素和1ul 12.5mM氯化锰和5.5ul双蒸水；所述10×等温反应缓存液含有200mM pH值为8.8的三羟基甲基氨基甲烷盐酸盐、100mM氯化钾、100mM硫酸铵、20mM硫酸镁和1%曲拉通X‑100；所述内引物1序列为AGTCCGAAAACTTTGATTTCTCTCATAGTCCCAACTATAAACTATGTCG，所述内引物2序列为GGAGTATGCTCGCAAGGGTGGTCAAATTAAGCCGCAGG，所述外引物1序列为GACGATCAGATACCGTCG，所述外引物2序列为TGGTAAGTTTTACCGTGTTGA，所述环引物1序列为GGAAGTAAACTTGCCCAATGCTTAG，所述环引物2序列为ACGGAAGGGCACCACCAGAT。