一种分离、纯化许旺细胞的方法

摘要

本发明属于细胞生物学领域，涉及一种分离、纯化许旺细胞的方法。该方法依次由下述步骤组成：首先，无菌情况下取神经段，去除神经外膜；然后用复合胶原酶NB4和dispase混合消化酶溶液消化神经束，弃溶液；再置于胰蛋白酶和EDTA中作用5～10分钟，得到去除神经束膜的神经纤维；随后将得到的神经纤维置于混合酶溶液中，振荡得到细胞混悬液；最后离心，重悬。利用本发明能够低成本、高效率的获得大量高纯度的许旺细胞，为损伤神经修复提供丰富优质许旺细胞。

主权项

一种分离、纯化许旺细胞的方法，其特征是该方法包括下述步骤：（1）无菌情况下取神经段，去除神经外膜；（2）用3~5倍组织量的复合胶原酶NB4和dispase混合消化酶溶液消化神经束10~20分钟，弃溶液；(3)将步骤（2）得到的神经束，置于37℃温浴的质量体积比0.1~0.25%胰蛋白酶‑0.02%EDTA的缓冲液中作用5~10分钟，得到去除神经束膜的神经纤维；（4）将步骤（3）得到的神经纤维置于步骤（2）中所述混合酶溶液中，置于37℃，摇床中振荡30~60分钟，得到细胞混悬液；（5）以600g离心5~10分钟，弃去上清，用许旺细胞培养液重悬；所述的许旺细胞培养液是指含2μM forskolin及10ng/ml heregulin‑β‑1的DMEM培养基。