人凝血因子Ⅸ突变体毕赤酵母表达载体及构建方法和应用

摘要

本发明公开了人凝血因子Ⅸ毕赤酵母表达载体及构建方法和应用，其步骤是：根据hFIX基因序列，用RT-PCR技术从人肝细胞中中克隆出hFIX全长cDNA序列，构建用于毕赤酵母表达的融合了酵母α-factor信号肽和全长hFIX序列的酵母表达质粒pPIC9K-hFIX。继而构建酵母表达质粒pPICZαA-hFIX，在此基础上构建四种酵母菌hFIX高活性突变体。得到的hFIX酵母表达载体凝血活性明显高于标准hFIX。其中一种突变体经50L中试发酵研究，蛋白纯化产物分泌表达量为702mg/L，为以后低成本产业化生产治疗B型血友病的高效hFIX产品打下了良好的基础。

主权项

一种分离重组的质粒pPICZαA‑hFⅨ‑R338A，其序列为SEQ ID NO.20所示。