一种拟南芥根特异性表达基因ARSK1启动子的克隆方法

摘要

本发明涉及植物基因工程领域，特别涉及一种拟南芥根特异性表达基因ARSK1启动子的克隆方法，该方法包括以下步骤：获取拟南芥根特异性基因ARSK1、获取拟南芥根特异性表达基因ARSK1启动子。因为本发明克隆到拟南芥根特异性表达基因ARSK1启动子，该启动子为植物根系特异性表达的启动子，可以驱动相关功能基因的表达，所以该启动子具有特定地改变植物的根部形态、获得相应的抗旱植株潜力：转入该启动子的植株，在同等干旱条件下，存活率比相比对照组的野生型植株高60-70％。

主权项

一种拟南芥根特异性表达基因ARSK1启动子的克隆方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：Ⅰ、获取拟南芥根特异性基因ARSK1：A、分别从拟南芥植株中提取拟南芥根总RNA和拟南芥叶总RNA，再分别进行反转录PCR反应，分别扩增得到拟南芥根cDNA序列和拟南芥叶cDNA序列；B、分别以所述的拟南芥根cDNA序列和拟南芥叶cDNA序列为模板，分别根据拟南芥根特异性基因设计引物，再分别进行半定量PCR反应，筛选得到拟南芥根特异性基因ARSK1；Ⅱ、获取拟南芥根特异性表达基因ARSK1启动子：A、在线分析得到拟南芥根特异性表达基因ARSK1的启动子，再在拟南芥根DNA中进行克隆得到所述的拟南芥根特异性表达基因ARSK1启动子；步骤Ⅰ‑B中所述的拟南芥根特异性基因在拟南芥信息资源网站的编号分别为：AT1G79580.1、AT1G62980.1、AT1G66470.1、AT1G27740.1、AT1G54970.1、AT3G10710.1、AT1G12560.1、AT2G26420.1、AT1G12040.1、AT1G62440.1、AT3G62680.1、AT2G26290.1；所述的拟南芥根特异性表达基因ARSK1启动子的序列为SEQ ID No：1；在步骤Ⅱ之后，进行所述的拟南芥根特异性表达基因ARSK1启动子功能验证，包括以下步骤：A、在线分析得到将所述的拟南芥根特异性表达基因ARSK1启动子的转录起始位点、含有的顺势作用元件；B. 将所述的拟南芥根特异性表达基因ARSK1启动子进行5’端缺失处理，经过PCR反应得到ARSK1启动子缺失体片段；C. 将所述的ARSK1启动子缺失体片段分别构建ARSK1启动子缺失体GUS表达载体；D、将所述的ARSK1启动子缺失体GUS表达载体转化拟南芥植株，得到转化体植株，再进行检测。