一种基于体细胞核移植构建的牛体细胞克隆胚的处理方法

摘要

本发明公开了一种基于体细胞核移植构建的牛体细胞克隆胚的处理方法，将待移植的牛体细胞注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，在电融合之后1h，挑选成功融合的牛体细胞克隆胚用1μM的Oxamflatin处理牛体细胞克隆胚胎12h，可以显著提高牛体细胞克隆囊胚的发育率和质量，可高效体外生产牛体细胞克隆胚胎。

主权项

一种基于体细胞核移植构建的牛体细胞克隆胚的处理方法，其特征在于，包括以下步骤：1）将待移植的牛体细胞注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，在电融合后1h，挑选成功融合的牛体细胞克隆胚进行以下激活处理：首先在含5μmol/L离子霉素的mSOF溶液中室温孵育4min，然后在含2mmol/L 6‑DMAP和1μmol/L Oxamflatin的mSOF溶液中，在38.5℃、5%CO2、饱和湿度条件下培养4h；所述的mSOF溶液是以SOF培养液作为基础培养基，还包含有体积分数2%的BME、体积分数1%的MEM、体积分数1%的ITS、1mmol/L的谷氨酰胺、80mg/mL的BSA、100IU/mL的青霉素和0.1mg/mL的链霉素；2）牛体细胞克隆胚在进行激活处理后，转移到含1μmol/L Oxamflatin的G1.3培养液中，在38.5℃、5%CO2、饱和湿度条件下培养8h，再用G1.3培养液清洗多次，继续在G1.3培养液中培养至72h；然后将牛体细胞克隆胚转移到G2.3培养液中继续在38.5℃、5%CO2、饱和湿度条件下培养至第7d。