一种用于蛋白质组学分析的动物蛋白质样品的制备方法

摘要

本发明提供了一种用于蛋白质组学分析的动物蛋白质样品的制备方法，通过组织冰冻实现蛋白原位固定，对目标区域进行显微捕获切割，将切割下来的细胞通过组织裂提取总蛋白，改进了实验流程和样品制备技术，大大地减少了蛋白丢失、降解(或破坏)以及对蛋白质的人为修饰，减少了蛋白质与其他生物大分子的相互作用，并可使蛋白质处于完全变性状态，为实现低丰度目标蛋白点的高效识别分离效果很好，适用于蛋白质生物标志物的筛选与确定。

主权项

一种用于蛋白质组学分析的动物蛋白质样品的制备方法，所述方法包括：（1）组织标本获取：剥离蚯蚓的表皮组织，清洗、用滤纸吸去多余液体，所得组织标本于液氮中速冻后移至－80℃冰箱保存；（2）冰冻切片：组织标本从－80℃冰箱取出后，用－30℃的冰冻切片机切片，切片厚度10 μm，每例标本第1张切片用HE染色，以后每张切片只做苏木精染色；（3）显微捕获切割：将制备好的染色切片放在显微镜的载物台上，直视下比较观察选定要切割的区域，按最大捕获效率设定参数，具体为：光束直径60 μm，光束能量80 mV，激光传递脉冲为1.6 ms，捕获切割取得40 000~50 000个细胞，通过软件对所获取的细胞计数；（4）样本制备：切割下来的细胞加入组织裂解缓冲液中，冰浴振荡30~40 min，再1~5℃下超声处理2~5次后，离心，取上清，即得蚯蚓蛋白质样品，贮存于－80℃冰箱备用；所述组织裂解缓冲液组成如下：8 mol/L尿素，2 mol/L硫脲，4 % CHAPS，65 mmol/L DTT，0. 2%两性电解质，10 ml/L cocktail。