一种用农杆菌介导对裂壶藻进行基因转化的方法

摘要

本发明公开了一种用农杆菌介导对裂壶藻进行基因转化的方法。本发明提供的方法包括如下步骤：用重组农杆菌转化裂壶藻原生质体，得到转基因裂壶藻；所述重组农杆菌是将含有外源基因的质粒转化农杆菌得到的。本发明不需要涉及昂贵的仪器，易于操作，重复性好，且转化效率高，每107个藻体细胞可获得100个以上的转化子。本发明的建立为利用转基因技术改善裂壶藻的品质，获得生长速度快、油脂含量高、组分简单的裂壶藻新品种奠定了良好的基础。本发明方法对裂壶藻的遗传改良具有十分重要的意义。

主权项

一种制备转基因裂壶藻的方法，包括如下步骤：用重组农杆菌转化裂壶藻原生质体，得到转基因裂壶藻；所述重组农杆菌是将含有外源基因的质粒转化农杆菌得到的；所述农杆菌为农杆菌菌株LBA4404；所述裂壶藻为裂壶藻（Schizochytrium sp.）TIO1101 CGMCC No.4603；所述用重组农杆菌转化裂壶藻原生质体包括如下步骤：①用乙酰丁香酮对重组农杆菌进行预诱导；②将所述裂壶藻原生质体与完成步骤①的重组农杆菌共培养，得到转基因裂壶藻；所述步骤①中，所述预诱导的培养条件为28℃培养4‑5小时；所述步骤①在诱导培养基IM中进行，所述重组农杆菌在所述诱导培养基IM中的浓度为OD600=0.6‑0.8，所述乙酰丁香酮在所述诱导培养基IM中的浓度为250umol/L；所述步骤②中，所述共培养的条件为28℃震荡培养10‑18小时；所述步骤②在诱导培养基IM中进行；所述诱导培养基IM由水和溶质组成；所述溶质及其在所述诱导培养基IM中的浓度如下：NaCl 0.15g/L、MgSO4·7H2O 0.25g/L、K2HPO42.28g/L、KH2PO41.36g/L、CaCl2·H2O 0.078g/L、FeSO40.0025g/L、（NH4）2SO40.53g/L、葡萄糖1.98g/L、甘油0.54g/L、MES 7.808g/L；pH5.3。