主权项 |
一种3T3‑L1脂肪前体细胞诱导分化方法,其特征在于,包括以下步骤:(一)3T3‑L1前脂肪细胞株的复苏:从液氮种取出细胞株,立即置于37℃水浴箱中,至细胞液完全溶解时取出,将复苏的细胞加入在室温1000rpm离心5min,弃去上清,再加入培养液,吹打重悬,将重悬的细胞及培养液吸入培养皿中,显微镜下观察细胞形态及数量,将培养皿置于5%CO2的37℃恒温培养箱中培养;(二)3T3‑L1前脂肪细胞株的培养:显微镜下见细胞贴壁,呈梭行,透亮,细胞每2天更换1次培养液,倾斜培养皿,将培养液用移液管移去,沿壁加入培养液;(三)3T3‑L1前脂肪细胞株的传代:显微镜下见细胞贴壁,呈梭形或多角形,细胞密度约80%,倾斜培养皿,将培养液用移液器移去,沿壁加入温热的PBS溶液6ml,晃动培养皿后,用移液器移去,重复一次,加入Trypsin进行消化,显微镜下见细胞由不规则多角形或梭形收缩成圆形,过程约30秒,加入培养液终止消化,用移液器吹打,使细胞脱离培养皿底,吸入离心管中,1000rpm离心4min,倾去上清,加入培养液,吹打使细胞分散;取含有细胞的培养液加入孔板,置于5%CO2的37℃恒温培养箱中培养;(四)3T3‑L1前脂肪细胞株的诱导分化:上述传代细胞培养至完全长满后3天开始诱导分化;加入含有诱导剂(1.0uM地塞米松,1.0mM IBMX,1.7uM胰岛素)和小牛血清(10%)的DMEM培养液,培养2天;显微镜下见 少数细胞呈圆形,并有脂滴出现;加入仅有1.7uM胰岛素(1.7uM)、小牛血清(10%)的DMEM培养液继续培养;继续诱导6天后,显微镜下见细胞基本呈圆形,细胞内含有多个较大的脂滴,即分化为成熟的脂肪细胞。 |