| 主权项 |
一种大批量快速分离昆虫围食膜的方法，其特征在于，按照下列步骤进行：步骤一，取昆虫幼虫标本100头～200头，将放在冰浴上冷却；步骤二，取与昆虫幼虫标本数量相对应2mL的EP管，每管中加入2mL在0℃下提前冷却的浓度为0.7%的NaCI生理盐水，将所有装有生理盐水的EP管也放在冰浴上冷却；步骤三，依次取昆虫幼虫标本，用解剖针将其固定在塑料泡沫板上，用剪刀沿昆虫幼虫的腹中线剪开体壁，暴露出整个消化道组织，用手术刀片从前肠前端切断消化道，再切断后肠后端的消化道，然后从后肠后端用镊子分离出整个含有食物的围食膜组织，立即将其放入EP管中，每EP管放一条围食膜，继续放在冰浴上冷却，直至所有的EP管全部装有昆虫幼虫的围食膜组织；步骤四，将步骤三取出的全部含有围食膜的EP管，在冰浴上放到96孔塑料板上，再将另一96孔塑料板压在上面，用橡皮筋将两个塑料板紧固，然后，将紧固后塑料板放在可控温摇床摇床中，将可控温摇床的温度设置为0℃，转速为200转/分钟；步骤五，开启可控温摇床摇床15分钟，将EP管中的围食膜组织中的食物清洗出来；步骤六，取100mL的烧杯2～3个，加入在0℃下提前冷却的浓度为0.7%的NaCI生理盐水100mL，放在冰浴上，将上述步骤五中每个EP管中的围食膜用镊子夹出来，立即依次逐一放在烧杯中清洗2‑3次，直到围食膜透明漂浮，无任何食物附着为止；步骤七，将分离和清洗干净的围食膜收集，放在干净的EP管中，并立即放在液氮中快速冷却后，置‑80℃冰箱保存。 |
